SY0292 链cDNA Synthesi

产品简介
链cDNA Synthesi由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于科研试验,链cDNA Synthesi是我司众多优质核酸扩增(PCR)之一,质量堪比同类进口产品,价格非常优惠,目前正热烈促销中,恭候您的咨询订购。...
产品详细介绍
特别提示:包括链cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR(+gDNA wiper)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:链cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR(+gDNA wiper)
英文名称:First Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR(+gDNA wiper)
产品货号:SY0292
产品规格:200T
本品基于Reverse Trans
RNA模板先用4×gDNA wiper Mix短暂处理,可彻底去除残留的基因组DNA污染,保证后续的定量结果更加可靠,并且可简化qPCR引物设计,无需跨外显子/内含子仔细设计;随后直接加入5×Super Mix II,即可立即进行逆转录。
5×Super Mix II中含有逆转录反应所需的所有组分 (Buffer、dNTP、Reverse Trans
该产品适用于两步法RT-qPCR检测,针对qPCR进行特别优化,比例优化的Random primers/Oligo dT primer mix,使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始,zuì大程度保证了qPCR结果的可重复性。逆转录产物兼容SYBR Green和探针法qPCR。
产品组份:
RNase free ddH2O————1 ml×2
4×gDNA wiper Mix————400 μl
5×Super Mix IIa————400 μl
5×Co
a 包含Buffer、dNTP、Reverse Trans
注:与First Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR(SY0291)中的5×Super Mix成分不同,不可以混用。
b 除不含Reverse Trans
质量控制
所有组分经检测均无核酸外切酶,核酸内切酶,RNase残留。
功能检测:以1 pg-1 μg HeLa cell total RNA为模板,测试qRT-PCR性能。以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线,R2>0.990,斜率在-3.20到-3.60之间;在1 μg HeLa cell total RNA中混入100 ng human genomic DNA,经gDNA wiper Mix处理后,进行qRT-PCR,对照反应的Ct值>40。
储存条件:-20℃。
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货号:BTN90302
规格:5mL
本产品为专门用于PCR的MgCl2,其浓度为25mM,可以用于调节MgCl2的zuì佳浓度。
储存条件:低温运输、-20℃保存,有效期一年。
名称:石蜡油,PCR级
货号:BTN130841
规格:10mL
本产品是PCR级石蜡油试剂,专门用于PCR扩增、WGA扩增等实验时添加到反应体系中,封闭反应成分,防止溶液的挥发。
储存条件:常温运输及保存,有效期一年。
名称:即用型荧光定量RT-PCR试剂盒
货号:BTN101219
规格:50次
本产品是基于荧光染料检测的即用型双酶一管式RT-PCR试剂盒,可以对靶片段进行实时定量RT-PCR分析(quantitative RT-PCR、qRT-PCR)。产品含有经过优化的缓冲液组分、MMLV-Taq DNA聚合酶混合物、dNTPs、MgCl2及荧光染料DNAgreen等所有一管式实时定量RT-PCR所需要的成分,用户只需加入RNA模板和引物即可进行实时定量RT-PCR反应,具有广泛的用途。
产品特点:
1.一管式完成qRT-PCR反应,避免样品交叉污染,尤其适合临床应用。
2. 即开即用,用户不需要单独准备qRT-PCR所需的各种试剂。
3. 主要成分只有两个(RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix),将加样步骤减少到zuì低,大降低了加样误差,增加了可重复性。
4. 使用范围广,适用于从病毒RNA到人RNA的各种RNA模板。
5.高灵敏度,每个RT-PCR体系zuì低可以检测200拷贝的RNA分子,可扩增的模版RNA的zuì长达2000nt。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 双酶一管式qRT-PCR Buffer,2× | 750μl |
| MMLV-Taq Mix | 100μl |
| RNase-free水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。
使用方法:
1.在一干净的无RNase的PCR管中,先加入下列成分(下面只列出样品管的设置情况,用户可自己根据需要设置阳性和阴性对照):
| 成分 | 样品 |
| 自备RNA模板(分下面三种情况) | 见下 |
| 总RNA | 100-500ng |
| 或poly(A)mRNA | 10-500ng |
| 或体外转录得到的专一RNA | 0.01pg-500ng |
| RNA特异性引物一(自备) | 终浓度300nM(注1) |
| RNA特异性引物二(自备) | 终浓度300nM |
| RNase-free水 | 补到10μL |
| 双酶一管式qRT-PCR Buffer(2×) | 15μl |
| 自备ROX(某些荧光PCR机型需要) | 3μL(注2) |
| MMLV-Taq Mix | 2μl |
注1:通常初次使用本试剂时,可用引物浓度300nM进行实验,根据实验结果具体情况,在200~800nM范围内调整引物浓度。引物、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整,同时增减RNase-free水用量,保证总反应体积不变即可。
注2:如果使用ABI公司的7500,7700和7900三种型号的荧光PCR仪器,则需用自备的ROX进行Ct值校正。对ABI 7700和7900,ROX的zuì佳浓度为1×(即在每30μl反应体系中加3μl 10×ROX)。对ABI 7500,ROX的zuì佳浓度为0.05-0.1×(每30μL反应体系加0.3μL 10×ROX;也可将10×ROX稀释到1×,然后每个反应体系加入3μL 1×ROX)。ROX会在溶解曲线中产生噪音,因此,如果出现了杂峰,将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打勾,然后重新分析数据。对于iCycler IQ,MJ Opticon,MJ Chromo4,MX3000,MX4000,RotorGene3000,RotorGene 6000和LightCycler 480等型号的荧光PCR仪器,ROX不是必须的,但加入的话也不会影响整个PCR分析。
2. 轻柔混合均匀后放入PCR仪中进行荧光定量RT-PCR。
3. 设定RT-PCR反应条件时,一般将RT的条件设定成42℃ 30分钟,后接94℃变性5分钟,然后进入PCR循环(PCR参数将根据自备引物的Tm值和PCR产物长度由用户自行决定注)、zuì后72℃ 5分钟。并在退火或延长步骤中记录荧光信号。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时,zuì大吸收光谱在471nm,结合DNA时的zuì大吸收光谱在500nm,zuì大发射光谱在530nm。
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