RFT103 高保真DNA聚合酶

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特别提示：包括高保真DNA聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高保真DNA聚合酶
英文名称：Taq plus DNA Polymerase
产品货号：RFT103
产品规格：500U(100μl)|5×500U(5×100μl)

Taq plus DNA Polymerase是由pfu DNA Polymerase和Taq DNA聚合酶按照一定的比例混合而成，具有扩增效率高，错配率低的特点。与Taq DNA聚合酶相比，Taq plus DNA聚合酶具有扩增长度长，保真性好的优点；与pfu DNA聚合酶相比，具有扩增速度快，反应效率高的优点。此酶具有比Taq DNA聚合酶约3倍的PCR可信度。该酶的大多数PCR产物3’端带碱基A，可以通过TA克隆法进行克隆。适用于要求保真性和率的PCR反应，大多数情况下可以替代Taq DNA 聚合酶。

产品组成：
Taq plus DNA Polymerase(5U/μl)——————————100μl
10×Taq plus PCR buffer(含Mg2＋)——————————1ml

活性定义：1单位(U) Taq plus DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

贮存液：50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol

使用方法：
1、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

成分	体积	终浓度
Template	0.1-1μg	as you wish
Primer 1(10μM)	1μl	200nM
Primer 2(10μM)	1μl	200nM
10×Taq plus PCR buffer	5μl	1×
dNTP Mixture(10 mM)	1μl	200μM each
Taq plus(5 U/μl)	0.5-1μl	2.5-5U
ddH2O	up to 50μl	-

2、混匀后，离心快甩将反应液收集到管底。
3、PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
4、PCR仪上执行以下程序：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	1-5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火	Tm-5℃*	30 sec
延伸	72℃	1 min/kb
zuì后延伸	72℃	5 min	1

*注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定zuì佳的反应条件(温度、时间等)。

常见问题分析：
1、Taq plus DNA polymerase能扩增多长片段？
对简单模板(如λ噬菌体做模板)，可以扩增 kb片段；对复杂模板(如基因组DNA)，可以扩增 kb片段。
2、Taq plus DNA polymerase保真性怎样？
Taq plus含有3’-5’校对活性的聚合酶，有校对功能。保真性为普通Taq酶的3倍。
3、使用Taq plus DNA polymerase的扩增产物是否可以进行TA克隆？
由于使用Taq plus得到的PCR产物大多数带有A，可以进行TA克隆。
4、Taq plus DNA polymerase可以扩增高GC含量片段吗？
Taq plus可以扩增高GC含量片段，建议使用Taq plus配合2×GC buffer使用，而不建议使用10×Taq plus PCR buffer。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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