WH0068 Pfu DNA聚合酶

Pfu DNA聚合酶是高品质的核酸扩增(PCR)产品，由北京百奥莱博供应，本产品仅用于生物化学研究方面，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多Pfu DNA聚合酶等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括Pfu DNA聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Pfu DNA聚合酶
英文名称：Pfu DNA Polymerase
产品货号：WH0068
产品规格：250U|500U

本制品是从克隆有Pyrococcus furiosis DNA Polymerase基因的大肠杆菌中分离纯化的，Pfu DNA Polymeras具有5′-3′ DNA聚合酶活性和3′-5′的外切酶活性，能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。Pfu酶是目前已发现的所有耐高温DNA Polymerase中出错率zuì低的。其PCR产物为平端，可加A处理再与T载体连接或使用平末端克隆载体。本制品可用于DNA的高保真扩增，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析（SNP）和末端补平等。

产品组成：

组分	WH0068-1	WH0068-2
Pfu DNA Polymerase	250U	500 U
10× Pfu Buffer	1.8ml	1.8ml

10×Pfu Buffer
200mM Tris-HCl （pH 8.8);100 mM KCl;100 mM（NH4)2SO4;20 mM MgSO4;其它成分。
10×Pfu Buffer分为含Mg2+和不含Mg2+两种，可自选。不含Mg2+的Buffer另外配有25 mM Mg2+。如果没有特别，通常提供的为含有Mg2+的Buffer

储存条件：-20℃保存

活性定义：
1单位（U）Pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30min内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

质量控制：
SDS-PAGE检测纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。

注意事项：
1．Pfu酶具有3"-5"的外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，一般情况下Pfu酶的延伸速度为每分钟0.5-1 Kb；同时Pfu酶的3"-5"的外切酶活性可能降解引物，所以应先加dNTPs后，再加Pfu酶到反应体系中，并立即进行PCR反应。
2．用Pfu酶扩增时,引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，Tm在55-80℃之间，引物浓度在0.1-0.5μM之间，比Taq酶略高。
3．Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。

使用举例：
注意：以下举例为常规PCR反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物长短等具体情况，设定zuì佳反应条件。以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段。
1.PCR反应体系的建立，50μl体系如下（可根据比例放大或缩小体系)：

成份	体积
Template	＜1μg
Primer 1（10 μM）	1 μl
Primer 2（10 μM）	1 μl
10×Pfu Buffer	5 μl
dNTP Mixture（2.5 mM)	4 μl
Pfu （2.5 U/μl)	0.5-1 μl
ddH2O	补至50μl

2．PCR反应循环的设置：
  
3．结果检测：反应结束后取5 μl反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。

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