WH0039 酵母质粒小提试剂盒

酵母质粒小提试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于生化实验研究等领域，本品质量稳定，价位合理，需要酵母质粒小提试剂盒等DNA提取纯化产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括酵母质粒小提试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：酵母质粒小提试剂盒
英文名称：Yeast Plasmid mini Extraction Kit
产品货号：WH0039
产品规格：50次

本试剂盒对普通的碱裂解法进行了改进，可快速得到高纯质粒DNA，并祛除基因组DNA。通过离心吸附柱吸附、洗涤DNA，方便快速，不需使用有毒有害试剂，可同时处理多个样品。除适用于酵母细胞外，也可用于大肠杆菌。质粒得率与酵母菌株、质粒拷贝数、培养条件等因素有关。

试剂盒组成：

组分	50T
平衡液BL	30ml
溶液YP1	15ml
溶液YP2	15ml
溶液YP3	20ml
去蛋白液PD	30ml
漂洗液PW	15ml
洗脱缓冲液EB	15ml
RNaseA（10mg/ml)	150μl
吸附柱CP2	50个
收集管（2ml)	50个

保存条件：室温（15-25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。溶液YP1加入RNase A后，应置于2-8℃，可稳定保存6个月。单独包装的RNase A可在室温保存12个月。

需要自备的试剂：Lyticase（目录号：WH0216)，山梨醇buffer。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．溶液YP1使用前先加入RNaseA （将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
2．使用前先检查平衡液BL、溶液YP2和YP3是否出现浑浊，如有混浊现象，可置于37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
3．溶液YP2和YP3使用后应立即盖紧盖子。
4．所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心，速度为12000rpm （~13400×g )。
5．提取的质粒量与酵母菌的培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
6．实验前使用平衡液处理吸附柱，可以zuì大限度激活硅基质膜，提高得率。
7．用平衡液处理过的柱子zuì好当天使用，放置时间过长会影响效果。

使用方法：
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．柱平衡步骤：向吸附柱CP2中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12000rpm（~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
2．取1-5ml酵母培养物（不超过5×10⁷酵母细胞），12000rpm （~13400×g )离心1 min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
3．酵母细胞壁的破除：
  a、酶法：向菌体中加入300 μl山梨醇buffer，加入大约50U Lyticase，充分混匀，并在摇床上220rpm，30℃处理1h。4000 rpm（~1500×g)离心10min，弃上清，收集沉淀。加入250 μl溶液YP1（请先检查是否已加入RNase A）重悬沉淀。
  注意：以上Lyticase的用量和处理时间为经验值，根据酵母菌株和酵母细胞数量的不同，所用Lyticase的浓度和孵育时间应该进行适当调整。
  b、玻璃珠法：向菌体中加入250 μl溶液YP1（请先检查是否已加入RNase A）重悬沉淀，彻底悬浮菌体。加入0.1g直径为0.45-0.55mm的酸洗玻璃珠，涡旋振荡10min。
4．向管中加入250 μl溶液YP2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分混匀，室温放置5-10min。
  注意：温柔混匀，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠。
5．向管中加入350 μl溶液YP3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm （~13400×g )离心20 min。
  注意：YP3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6．小心地将上清液加入吸附柱CP2中（吸附柱放入收集管中），12000rpm （~13400×g )离心1 min，倒掉废液，将吸附柱CP2放入收集管中。
7．向吸附柱CP2中加入500μl缓冲液PD，12000rpm （~13400×g )离心1 min，倒掉废液。
8．向吸附柱CP2中加入600 μl漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心1 min，倒掉废液，将吸附柱CP2放入收集管中。
9．重复操作步骤8。
10．将吸附柱CP2放入收集管中置于12000rpm （~13400×g )离心2 min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP2开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
11．将吸附柱CP2置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100 μl洗脱缓冲液EB，室温放置2 min，12000rpm （~13400×g )离心2 min将质粒溶液收集到离心管中。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，再次离心。

补充说明：
1．通常酵母质粒拷贝数都很低，一般通过电泳或者分光光度计法都很难检测到。提取的质粒如果用于下一步实验，通常建议使用量为：
  可使用1-5 μl用作PCR模板。
  可使用5-10 μl用于转化大肠杆菌。
2．转化大肠杆菌时应使用商业化高转化效率的感受态细胞，如我公司公司的目录号为WH0190和WH0189等产品。

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货号	名称	规格
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名称：海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取)
货号：BTN130401
规格：50次
本试剂盒是在柱式动物DNA提取试剂盒(BTN71206)试剂盒基础上优化改良而得，专门针对海洋动物的基因组DNA提取的试剂盒，可用于鱼类、虾类、贝类、蟹类等海洋动物和水产动物的荃因组DNA提取，可以有效去除海洋动物组织中的蛋白、脂肪及其他有机化合物等杂质。

产品特点：
1. 使用本试剂盒提取的基因组DNA可适用于各种常规分子生物学操作，如:酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等试验。
2. 操作简单安全，1小时内即可获得超纯的基因组DNA，纯化过程中不需要使用苯酚lǜ仿等有机试剂。
3. 应用广泛，适用于多种动物细胞和动物组织等。
4. 高，质量和国外同类试剂盒相当，价格更低。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
蛋白酶K溶液(20mg/mL)	1ml
溶液B	15ml
溶液C	13ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	15ml
通用洗脱液	15ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(蛋白酶K溶液需要低温运输，-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：
使用前请先在溶液C和通用洗柱液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1. 切取不多于30mg的组织材料，放入装有200μL溶液A的离心管中，涡旋振荡15秒。注意：根据提取的组织不同，起始量也稍有不同，腮的细胞量较大，一般建议提取量不超过20mg。如果需要去除RNA，可加入40μL RNase A(10mg/mL)溶液(客户自备，BTN3160)，振荡15秒，室温放置5分钟。
2. 加入20μL蛋白酶 K溶液(20mg/mL)，涡旋混匀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。在56℃下放置，直至组织完全溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。注意：不同组织裂解时间不同，通常需0.5-2小时即可完成。扇贝组织0.5小时基本可裂解完全，虾和鱼类组织1小时。每小时振荡混合样品2-3次，每次振荡混匀15秒。
3. 加入200μl溶液B，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意：加入溶液B时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA 量少和提取出的DNA 不纯。
4. 加入200μl 无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个离心吸附柱中(吸附柱放入收集管中)，12000rpm(～13,400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放回收集管中。
6. 向离心吸附柱中加入500μl溶液C(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm(～13,400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。
7. 向吸附柱中加入600μl 通用洗柱液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm(～13,400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。
8. 重复操作步骤7。
9. 将吸附柱放回收集管中，12000rpm(～13,400×g)离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
10. 将吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl 通用洗脱液，室温放置2-5分钟，12000rpm(～13,400×g)离心2分钟，将溶液收集到离心管中。注意：通用洗脱液的体积不应少于50μl，体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱中，室温放置2分钟，12000rpm(～13,400×g)离心2分钟。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用超纯水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5 范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA 降解。

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