WH0028 细菌基因组DNA提取试剂盒

细菌基因组DNA提取试剂盒是高品质的DNA提取纯化产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于科研试验，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多细菌基因组DNA提取试剂盒等DNA提取纯化产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括细菌基因组DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细菌基因组DNA提取试剂盒
英文名称：Extraction kit for genomic DNA from bacteria
产品货号：WH0028
产品规格：50次

本试剂盒采用可以、专一结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，既适用于革兰氏阴性菌基因组DNA的提取，也可适用于革兰氏阳性菌基因组DNA的提取。本试剂盒也可用于食品致病菌（微生物)基因组提取，如：金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、出血性大肠杆菌O157：H7、单增李斯特、沙门氏菌、阪崎肠肝菌等。可从1-5ml细菌培养液中，快速提取纯化10-40μg纯净的基因组DNA，所得基因组DNA可直接用作PCR模板、酶切、杂交等分子生物学实验。

产品特点：
·简单快速：革兰氏阴性菌在1h内可获得高纯的基因组DNA。
·质量好：DNA可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。

细菌类型	革兰氏阴性	革兰氏阳性
细菌浓度	2×108cells/ml	3.5×108cells/ml
培养液体积	1ml	1ml
DNA得量	15～20μg	6～13μg
OD260/OD280	1.7～1.9	1.7～1.9

注：细菌种类、培养时间不同提取的DNA量会有差异；革兰氏阳性菌需要使用溶菌酶进溶菌等特殊处理后，再按革兰氏阴性菌的操作步骤进行基因组DNA的提取。

试剂盒组成：

组分	50T
缓冲液GA	15ml
缓冲液GB	15ml
缓冲液GD	13ml
漂洗液PW	15ml
洗脱缓冲液TE	15ml
Proteinase K	1ml
吸附柱CB3	50个
收集管（2ml）	50个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

自备试剂：溶菌酶（革兰氏阳性菌)、无水乙醇、溶菌酶缓冲液（20mM Tris,pH8.0;2mM Na2-EDTA;1.2%Triton-100 )

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2．若缓冲液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，并摇匀后使用。
3．所有的离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。

使用方法：
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．取细菌培养液1-5ml，10000rpm（~11500×g)离心1 min，尽量吸净上清。
2．向菌体沉淀中加入200μl缓冲液GA，振荡至菌体彻底悬浮。
  注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可略过第2步骤，加入溶菌酶进行破壁处理，具体方法为：加入180 μl缓冲液（20mM Tris,pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2% Triton；终浓度为20mg/ml的溶菌酶（溶菌酶必须用溶菌酶干粉溶解在缓冲液中进行配制，否则会导致溶菌酶无活性))，37℃处理30 min以上。
  如果需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：WH0217），振荡15 sec，室温放置5 min。
3．向管中加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。
4．加入220 μl缓冲液GB，振荡15 sec，70 ℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
  注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。
5．加220 μl无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
6．将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000rpm （~13400×g )离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7．向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
8．向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉废液，吸附柱CB3放入收集管中。
9．重复操作步骤8。
10．将吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
11．将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12000rpm （~13400×g )离心2 min，将溶液收集到离心管中。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min，12,000rpm（~13400×g )离心2 min。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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本试剂盒是非常的基因组DNA抽提试剂盒。可以抽提动物组织、鼠尾、培养细胞、细菌、酵母、动物血液、昆虫以及固定组织的包括基因组DNA在内的总DNA。一个试剂盒通过说明书中提供的不同操作方法，可以抽提除植物样品外的几乎所有样品中的总DNA。

样品先被蛋白酶K消化，随后加入适合DNA结合到纯化柱上的缓冲液，然后加入到纯化柱内。通过高速离心，使DNA在穿过纯化柱的瞬间，结合到纯化柱上，随后通过两次洗涤去除各种杂质，zuì后通过洗脱液把DNA洗脱下来。整个过程无需酚lǜ仿抽提，无需酒精沉淀，样品裂解后仅需约15分钟即可完成。

通过本试剂盒纯化得到的基因组DNA的长度zuì长可达50kb左右，平均为30kb左右，zuì短为100bp的DNA也可以被纯化。如需获得更长的基因组DNA，对于哺乳动物样品，包括组织或细胞等，可以使用百奥莱博的(YT012)哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒。通过本试剂盒获得的总DNA，OD260/OD280的范围通常在1.7至1.9之间。

本试剂盒可以抽提少至数百个细胞，多至25mg组织、0.5-1cm鼠尾、500万个培养细胞、20亿个细菌或5000万个酵母。样品用量过多，反而会影响抽提效果。如果待抽提样品的DNA含量小于5ng，建议加入适当量的carrier DNA，例如poly-dT或其它对后续实验没有干扰的DNA，也可以加入适当量的carrier RNA，例如yeast RNA等，以改善抽提效果。

本试剂盒的标准操作步骤抽提得到的总DNA会含有少量RNA，但如果按照可选步骤加入RNase A，就可以获得不含RNA的高纯度总DNA。含有RNA的总DNA可以用于PCR，但对于某些其它的后续反应可能会产生一些影响。

纯化柱对于DNA的zuì大容量约为30微克。通常每200万Hela细胞或500万淋巴细胞可以抽提得到15-25微克总DNA，每25mg肝、脑、肾组织可以抽提得到10-30微克总DNA，每25毫克心、肺组织可以抽提得到5-10微克总DNA，每10mg脾组织可以抽提得到5-30微克总DNA，每1.2cm小鼠尾尖或0.3cm大鼠尾尖可以获得10-25微克总DNA。本试剂盒可以抽提50个样品的总DNA。

产品组份：
样品裂解液A——————10ml
样品裂解液B——————11ml
洗涤液I————————21ml (次使用前加入7ml无水乙醇)
洗涤液II———————16ml (次使用前加入24ml无水乙醇)
洗脱液————————22ml
蛋白酶K————————1.1ml
DNA纯化柱及废液收集管————50套

储存条件：室温，有效期一年。(蛋白酶K需-20℃保存)

注意事项：
1.抽提细菌、酵母样品时还需要一些特定的试剂，详情请参考相关实验步骤。
2.如需制备不含RNA的高纯度总DNA，需自备RNase A。
3.温度较低时样品裂解液A或样品裂解液B中可能会有沉淀产生，属正常现象。使用前必须检查一遍。如有沉淀，55℃水浴孵育使沉淀溶解，混匀后使用。
4.次使用前洗涤液I需添加7ml无水乙醇，洗涤液II需添加24ml无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
5.本试剂盒需使用55℃水浴，请提前作好准备。
6.除特别说明外，每次Vortex应控制在5-10秒左右。
7.本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
8.废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。
9.参考使用说明，从某些样品中抽提总DNA不需要使用样品裂解液A。

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