BTN60402 超快非醇核酸沉淀剂

超快非醇核酸沉淀剂是高品质的核酸电泳和回收产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于生化实验研究等领域，超快非醇核酸沉淀剂是我司众多优质核酸电泳和回收之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括超快非醇核酸沉淀剂在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：超快非醇核酸沉淀剂
英文名称：Magic Solution DNArc
产品货号：BTN60402
产品规格：30次

本产品是我司的一管式非醇DNA/RNA沉淀剂，其主要特点超快速度,是只需要离心2分钟即可快速沉淀回收溶液中的单双链DNA或RNA(包括探针)，可广泛用于DNA/RNA的去盐，去蛋白,反应纯化，浓缩等。

产品特点：
1. 明显提高DNA或RNA沉淀的得率和DNA或RNA提取的产率。
2. 本产品无核酸污染也无DNA酶和RNA酶活性。
3. 痕量DNA和RNA(20pg)回收率达95～98%。
4. 不影响酶切、连接、转录、PCR、转化、转染等实验。
5. 不影响电泳和DNA-蛋白相互作用。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。溶液A呈红色，如果颜色发生变化，则表示pH已经改变，请弃之不用。溶液B为无色液体，会在瓶底产生少量晶体状产生沉淀，用前无需溶化，直接取上清液使用)。

使用方法：
1.将1/10体积的溶液A加入到DNA溶液中(包括PCR，酶切反应液等)，振荡混匀。如果回收20 Kb以上的DNA片段，混匀时需要温和；对20Kb以下的DNA片段，可以剧烈震荡。
2.室温静置至少2分钟。此步十分关键，不能省略而直接离心。
3.13000 g室温离心5分钟后，小心吸弃上清。
4.加入0.8mL溶液B，充分震荡混匀。
5.13000 g室温离心2分钟，小心吸弃上清。
6.再用0.2mL溶液Ｂ重复第4-5步一次。
7.小心吸弃上清后即得纯化的DNA沉淀，加入少量TE或水，充分吹打溶解。如果zuì后还会有少量白色不溶沉淀，属于正常现象。

疑难解答：
Q：电泳为何不能检测到回收的DNA？
A：zuì可能原因是各步加入溶液后没有充分震荡混匀，其次是沉淀在各步吸弃上清时候不小心吸走而丢失，三是溶液A的pH发生改变,四是DNA溶液的盐离子浓度或pH值太高。
Q：电泳时为何有残留荧光物在加样孔中？
A：可能是琼脂糖凝胶中的杂质吸附的DNA，吸取 DNA样品时zuì好先短暂离心，只取上清液。这些不溶杂质一般不影响后续反应。使用高纯度的琼脂糖可以减少杂杂质的污染。百奥莱博一般使用 OXOID的琼脂糖，得到的DNA可以用于常见的分子生物学后续反应。
Q：本产品与贵公司的Magic Gel DNArc是否相同。
A： Magic Gel DNArc 有离心管和特殊的融胶液，专门用于从胶中回收DNA；本产品用于从反应液中纯化回收DNA，不需要另外提供离心管和融胶液。Magic Gel DNArc的溶液B和溶液C 分别与本产品的溶液A和溶液B类似但浓度不完全相同，建议不要互用。

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名称：一站式DNA非变性PAGE电泳套装
货号：BTN100205
规格：30次
本品就是专门用于非变性PAGE的试剂。非变性PAGE电泳是研究SSCP-PCR(single-strand conformation polymorphism-PCR、单链PCR片段构象多态性)和凝胶滞阻(Gel Shift)的重要研究手段，因为在非变性PAGE中，DNA的迁移率除跟长短相关外，还跟其构象和结合的蛋白质相关。

产品特点：
1.一站式，用户只需要准备水和样品，十分方便。
2. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。
3. 灵活，高浓度的丙烯酰胺溶液可用于配制各种浓度的PAGE胶，分开提供的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺可用于配制各种交联度的PAGE胶。
4. PAGE电泳后可直接用于银染等后续试验。

产品组成：

成分	规格	保存
丙烯酰胺	60g	室温
甲叉双丙烯酰胺	2g	室温
TEMED	1.5ml	4℃，避光
过硫酸铵(干粉)	1g	室温
非变性PAGE上样液，2×	1ml	4℃
10×TBE(BTN90313)	250ml	室温
说明书	1份

储存条件：常温运输，保存条件见上表，有效期一年。

使用方法：
用于SSCP-PCR分析的非变性PAGE电泳(其他应用请相应修改参数)

一、PAGE浓度的选择：zuì好使用浓度为5-12%的丙烯酰胺胶，因为SSCP-PCR的扩增长度一般在150-200bp之间，而5%的PAGE的有效分辨范围为80-500bp、8%的PAGE的有效分辨范围为60-400bp、12%的PAGE的有效分辨范围为40-200bp。

二、PAGE交联度的选择：交联度越低，孔径越大，对DNA分子构象的变化越灵敏，SSCP分辨率越高，但过低则胶太软，不好进行电泳后的后续操作，所以一般选择1-2%的交联度(即丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺在49:1到48:2之间)。

三、体积的选择：SSCP-PCR检测需要长约30-40cm的测序胶板，可以结合梳子的厚度，计算胶的体积。
操作：
1. 配制PAGE胶(这是配制100mL胶的用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A：新鲜配制10%的APS(过硫酸铵)：按每0.1克过硫酸铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鲜配制适当交联度29:1的30%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液(AB溶液，下同)：在本产品提供的装有60 g丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和全部的甲叉双丙烯酰胺，充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)，即得到30%的AB(29:1)溶液。此溶液zuì好在一个月内用完，必须4℃避光保存。
C：配SSCP PAGE胶：在一个250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去离子水、30% AB溶液溶液和10×TBE缓冲液。丙烯酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

PAGE胶浓度	各成分用量(单位：ml)			总体积(ml)
	去离子水	30%AB溶液	10×TBE缓冲液
5%	73.4	16.6	10.0	100
6%	70.0	20.0	10.0	100
7%	66.7	23.3	10.0	100
8%	63.3	26.7	10.0	100
9%	60.0	30.0	10.0	100
10%	56.7	33.3	10.0	100
11%	53.3	36.7	10.0	100
12%	50.0	40.0	10.0	100

注：有大量文献报道PAGE胶中加入5%-10%的甘油能提高某些位点的分辨率。如果选择加入10%的甘油，则减少去离子水的用量10mL，同时加入10mL甘油。
D：摇晃混匀。zuì好能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应)，无条件也可以不脱氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速摇匀后倒胶。
F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
G:室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
H: 拔出梳子，用1×TEB液冲洗加样孔。
I: 放4℃冰箱预冷30分钟-12小时。为了防止胶收缩，zuì好顶部加少量1×TBE缓冲液。预冷的胶有利于保持单链DNA的构型。
2. 将预冷的凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够1×TEB电泳液。
3. 取3-5μl SSCP-PCR样品，加入等体积2×非变性PAGE上样液，85℃处理5分钟后冰浴。用前短暂离心后取2μl上样。
4.连接电源线，打开电源开关。如果PAGE中不含甘油，则使用25W的功率，电泳5-7小时(对3—40cm长的PAGE胶而言)。如果使用含甘油的PAGE，则使用8W的功率，电泳16-18小时。由于温度变化过大会改变DNA构型，所以电泳时zuì好能保持恒温。对不含甘油的PAGE，zuì好恒温在4℃、对含甘油的PAGE，zuì好恒温在25℃。
5. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理(如银染)。

疑难解答：
一、为何SSCP-PCR带型有复合条带？
原因之一：可能是残留的PCR引物跟单链的DNA结合形成迁移率不同的条带。解决方法是稀释PCR或电泳前将PCR产物进行纯化。
原因之二：可能是PCR产物用量过高，彼此复性。解决办法是将PCR产物稀释后4-8倍后使用。
二、如何提高电泳分辨率？
可以在配胶时加入甘油(终浓度为5%-10%)，因为甘油是弱变性剂，能部分展开DNA折叠结构，增加表面积，增加电泳时位移差异。但加入甘油后粘性变大，电泳速度变慢，因此只适合室温电泳使用，不要4℃电泳。如果条件允许，zuì好同时做加甘油和不加甘油的电泳实验。

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