WH0033 无内毒素质粒少量提试剂盒

无内毒素质粒少量提试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研目的，我公司的无内毒素质粒少量提试剂盒品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括无内毒素质粒少量提试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：无内毒素质粒少量提试剂盒
英文名称：Endotoxin-free Plasmid mini Extraction Kit
产品货号：WH0033
产品规格：50次

本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术，专一地结合质粒DNA。同时采用特殊的去内毒素系统，可有效的去除内毒素、蛋白等杂质；整个提取过程仅需1h，方便快捷。质粒提取得率与质粒拷贝数、宿主菌的种类和培养条件等因素有关，每次处理5-15ml过夜培养的细菌培养液，提取多至70μg的质粒DNA。

产品特点：
·快速高产：1h左右提取5-70μg质粒。
·质粒纯度高：特殊的去内毒素体系配合CP4吸附柱特异吸附核酸，内毒素含量低。
·应用广泛：适用于酶切、PCR、测序、连接、转化等常规实验及基因治疗、细胞显微注射、基因沉默、转染等高端实验。

提取实例：

使用本试剂盒提取不同体积的质粒，洗脱体积200μl，低拷贝（pBR322)上样3μl；高拷贝（pBS)上样2μl，1%琼脂糖凝胶，6V/cm，电泳30min。


使用本试剂盒提取pEGFP质粒转染293T细胞，转染48小时后观察细胞状态检测GFP荧光。

质粒得率：

质粒类型	处理量	得率	质粒
高拷贝质粒	5～15ml	15μg～70μg	pTZ,pUC,pBS,pTG-T
低拷贝质粒	5～15ml	5μg～25μg	pBR322,pACYC及其衍生载体,pSC101 及其衍生载体,SuperCos,pWE15

试剂盒组成：

组分	50T
平衡液BL	30ml
溶液P1	30ml
溶液P2	30ml
溶液P4	30ml
去蛋白液PD	30ml
漂洗液PW	15ml
洗脱缓冲液TB	15ml
RNaseA（10mg/ml)	300μl
过滤柱CS	50个
吸附柱CP4	50个
收集管（2ml)	100个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2-8℃。（注意：当低温贮存时，使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以平衡溶液温度）。单独包装的RNaseA在室温可稳定保存12个月以上。加入RNaseA后的溶液P1应置于2-8℃保存，可稳定保存6个月。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．溶液P1在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
2．次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液PW中加入无水乙醇。
3．使用前先检查平衡液BL、溶液P2和P4是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
4．注意不要直接接触溶液P2和P4，使用后应立即盖紧盖子。
5．所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心，速度为12000rpm （~13400×g )。
6．提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、P4的用量，洗脱缓冲液应在65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间，以增加提取效率。
7．实验前使用平衡液处理吸附柱，可以zuì大限度激活硅基质膜，提高得率。
8．用平衡液处理过的柱子zuì好当天使用，放置时间过长会影响效果。

使用方法：

1．柱平衡步骤：向吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12,000rpm （~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
2．取5-15ml过夜培养的菌液加入离心管中，12000rpm （~13400×g )离心1 min，尽量吸除上清。
  注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中,菌体量以能够充分裂解为佳，过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。
3．向留有菌体沉淀的离心管中加入500μl溶液P1 （请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
  注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
4．向离心管中加入500μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
  注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
5．向离心管中加入500μl溶液P4，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀，然后室温放置10min左右，12000rpm （~13400×g )离心10min，此时在离心管底部形成沉淀。
  注意：P4加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6．将上一步收集的上清液分次加入过滤柱CS（过滤柱放入收集管中），12000rpm（~13400×g )离心2 min，滤液收集在干净的2 ml离心管中（自备）。
7．向滤液中加入0.3倍滤液体积的异丙醇（加入异丙醇过多容易导致RNA污染），上下颠倒混匀后转移到吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）。
  注意：过滤后滤液会损失，根据损失的不同请加入不同体积的异丙醇。吸附柱CP4的zuì大容积为700 μl，所以需要分次过柱。
8．室温12000rpm （~13400×g)离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  注意：将第7步中所得溶液分次过柱，每次均按以上条件操作。
9．向吸附柱CP4中加入500μl去蛋白液PD，12000rpm （~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4放入收集管中。
10．向吸附柱CP4中加入600 μl漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4放入收集管中。
  注意：加入漂洗液PW后，如果室温静置2-5 min，有助于更好地去除杂质。
11．向吸附柱CP4中加入600 μl漂洗液PW，12000rpm （~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液。
12．将吸附柱CP4重新放回收集管中，12000rpm （~13400×g )离心2 min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP4开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
13．将吸附柱CP4置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300 μl洗脱缓冲液TB，室温放置2 min，12000rpm （~13400×g )离心1 min将质粒溶液收集到离心管中。
  注意：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，重复步骤13。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。洗脱缓冲液体积不应少于100 μl，体积过小影响回收效率。且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

质粒DNA浓度及纯度检测：
1．得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。电泳可能为单一条带，也可能为2到3条DNA条带，这主要与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。OD₂₆₀值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA。
2．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7–1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，但并不表示纯度低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值。

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名称：柱式鼠尾DNA提取试剂盒
货号：BTN121102
规格：50次
大鼠和小鼠是重要的生命科学实验材料，鼠尾则是小鼠zuì佳活体样品，常用于基因型的快速检测。本试剂盒采用独特的酶和缓冲体系，可以快速得高质量、高纯度的基因组DNA。

产品特点：
1. 即开即用，不需要自己准备各种溶液。
2. 简单快速，zuì快可在60分钟内从0.5 鼠尾中提取到10μg DNA。
3. 柱式法回收，所得DNA 纯度高(OD260/280一般在1.7-1.9)。片段大(一般在20 kb以上)、纯度高。
4. 安全环保：无需有机试剂抽提。
5.可用于后续的酶切、PCR、Southern杂交、文库构建等实验。
6. 除鼠尾外，还可用于其他动物组织(心，肝、肾、脾和肌肉等)。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
蛋白酶K溶液(10mg/mL)	1ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱(15层膜)	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(蛋白酶K溶液需要低温运输，-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 剪取0.5-1cm鼠尾(约15-30mg)，尽量剪短成的1mm左右小段，放入干净的1.5mL塑料离心管中。若不需要立即使用，可以在液氮中或-80℃长期放置，或-80℃放置数天。如果是动物心，肝、肾、脾和肌肉等组织，则取30mg左右并充分剪碎。
2. 加入1mL溶液A和20μl蛋白酶K溶液(10mg/mL)，37℃保温10小时(一般过夜保温就可以)。也可以放置于65℃金属浴或水浴中保温2小时，其间每间隔10分钟涡旋混匀一次(或用手指用力弹击离心管底部数次)以帮助鼠尾酶解。对于老年小鼠鼠尾，可以适当增加酶解时间到3-4小时。如果有温控混合器使反应体系始终处于摇晃状态，则效果更佳。
3. 加入0.3mL的溶液B和0.2mL的自备氯fǎng，振荡器上振荡30秒充分混匀。
4. 12000rpm室温离心3分钟，小心将上清转移到新的1.5mL塑料离心管中。
5.在上清液中加入等体积的溶液C，上下颠倒30秒充分混匀。
6. 将混合液分两次转移到离心吸附柱中。每次是先将0.7-0.8mL混合液转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟，12000rpm室温1分钟，弃穿透液。再把剩余的一半上柱，重复此操作。
7. 将0.7mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 将0.3mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中，12000rpm离心半分钟(此步为第二次洗涤，一般可以省略)。
9. 空甩离心吸附柱半分钟去除残留液体。
10. 将离心吸附柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中，加入30-50μl DNA 洗脱液2.0。
11. 12000rpm离心1分钟，管底即为DNA溶液，可立即用于PCR，也可长期保存在－20℃。

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货号	名称	规格
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BTN71101	一步法大提质粒DNA提取试剂盒	5次
BTN100307E	酸洗玻璃珠(1500～2000μm)	10g
WE0166	无内毒素质粒中提试剂盒	50次
ALH156	酵母基因组DNA大量提取试剂盒	10次

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