WH0044 大量PCR产物DNA纯化试剂盒（

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特别提示：包括大量PCR产物DNA纯化试剂盒（20μg)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：大量PCR产物DNA纯化试剂盒（20μg)
英文名称：Mass DNA purification kits for PCR products
产品货号：WH0044
产品规格：50次

本试剂盒使用独特的离心吸附柱、专一地与DNA片段结合，同时zuì大限度除去蛋白质、离子及引物小片段等杂质。除了可用于PCR产物回收，对于一些酶反应液回收（酶切、连接、探针标记等）也同样适用。可回收100 bp-20 kb DNA片段，回收率可高达80%以上（＜ 100bp或＞ 10 kb的DNA片段，回收率为30%-50%）。得到的DNA可直接用于连接、转化、酶切、测序、杂交等分子生物学实验。

产品特点：
·速度zuì快：15min完成DNA回收，可同时处理多个样品，节省时间。
·步骤zuì少：操作简单，几次离心即可完成。
·效率zuì高：独特的离心柱和精心配制的缓冲液保证每次zuì大量回收到纯度高的目的DNA。
·处理量：每个离心吸附柱每次zuì多可吸附的DNA量为20μg。

试剂盒组成：

组分	50T
平衡液BL	30ml
结合液PB	60ml
漂洗液PW	15ml
洗脱缓冲液EB	15ml
吸附柱CB3	50个
收集管（2ml)	50个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．本试剂盒适用于无选择性的回收溶液中所有DNA片段（可去除50 bp以下的小片段），如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择胶回收试剂盒。
2．洗脱缓冲液加量应根据回收前DNA量来决定：如回收前DNA只有1-5 μg左右，则应选用少量型离心柱，加20-50μl洗脱缓冲液；回收前为5-20μg左右的DNA，应选用普通型离心柱，加30-100 μl洗脱缓冲液；如回收前有20-30 μg左右DNA，则应选用大量型离心柱，加50-300 μl洗脱缓冲液。
3．回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。
4．对于<100 bp和>10 kb的DNA片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。
5．平衡液BL的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。使用前请先检查平衡液BL是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
6．用平衡液处理过的柱子zuì好当天使用，放置时间过长会影响效果。

使用方法：
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1．柱平衡步骤：向吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中）加入500 μl的平衡液BL，12000rpm（~13400×g)离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
2．估计PCR反应液或酶切反应液的体积，向其中加入5倍体积的结合液PB，充分混匀（无需去除石蜡油或矿物油）。
  注意：如PCR反应体系为100 μl（不包括石蜡油体积）,则加入500 μl结合液PB。
3．将上一步所得溶液加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），室温放置2 min，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
  注意：吸附柱容积为800 μl，若样品体积大于800 μl可分批加入。
4．向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
  注意：如果纯化的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议PW加入后静置2-5 min再离心。
5．重复操作步骤4。
6．将离心吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm（~13400×g)离心2 min，尽量除去漂洗液。将吸附柱置于室温放置数分钟，彻底地晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
7．取出吸附柱CB3放入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液EB，室温放置2 min。12000rpm（~13400×g)离心2 min，收集DNA溶液。
  注意：洗脱液的体积不应少于50μl，体积过少会影响回收的效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。DNA也可以用缓冲液（10mM Tris-Cl,pH8.0)洗脱。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，再次离心。

DNA浓度及纯度检测：
1．回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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名称：超级电泳液
货号：BTN151103
规格：100mL
本品是我司开发的超级核酸电泳液套装，其中的溶液A含抗水解的核酸染料，用于配制琼脂糖凝胶(溶液A也可用于电泳，但不经济)；溶液B为不含染料的电泳液。

产品特点：
1.高浓度，溶液A和溶液B用去离子水稀释100倍后可以直接用作配胶工作液和电泳工作液，100mL的产品可以配制10 L工作液。
2.低产热，用溶液A配制的胶在溶液B配制的电泳液中电泳时可用30 V/cm的中等电压(cm是指电泳槽两电级之间的距离)，一般的mini胶电泳(如检查PCR扩增)只需要5-10分钟即可完成，比TAE和TBE快4-5倍(TAE和TBE电泳一般需要40分钟)。当然，也可以按常规的电泳参数电泳，所需时间约为40分钟左右。
3. 用本产品溶液A 配制的琼脂糖凝胶可以在TBE和TAE缓冲液中低压电泳。用TBE 配制的琼脂糖凝胶也可以在本产品溶液B配制的电泳液中电泳(低压中压均可)。但用TAE 配制的胶不能在溶液B中电泳。
4. 用本产品电泳得到的DNA片段的胶回收率高于使用TAE和TBE电泳的胶回收，不影响后续的DNA胶回收和DNA连接等反应。
5.溶液A(配胶用)和溶液B(电泳用)均可以单独购买。

产品组成：

成分	A型	B型
溶液A(配胶液，含染料)	100ml	-
溶液B(电泳液，不含染料)	-	100ml
说明书	1份	1份

储存条件：常温保存和运输，有效期两年。如果本产品有沉淀析出现象，请65℃水浴溶解后使用。

使用方法：
将本品溶液A用去离子水稀释100倍(1mL溶液A加99mL去离子水)，混匀后直接用于配琼脂糖胶，溶液B用去离子水稀释100倍(1mL本产品加99mL去离子水)后直接用于做电泳液，其余操作跟TAE，TBE缓冲液一样。需注意的地方是：

1.电压：对一般minigel，一般可以用250-350V 跑5-10分钟；对大的电泳槽，可用400-450V 跑5-10分钟。若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象，请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限。若继续存在，可能需要更换新的缓冲液。
2. DNA条带扭曲：DNA样品中所含SDS量过高时(SDS 主要来于上样液)，DNA条带将出现扭曲，影响实验效果。建议使用不含SDS的上样液，zuì好使用跟我公司超级电泳液兼容的上样液。
3. 反复使用：本溶液A配制的电泳液至少可以重复使用2-3次，如果使用大电泳槽，可以重复使用的次数会更多。
4. TBE胶：已经用TBE电泳液配置好的琼脂糖凝胶，如果不含EB，SYBR Green等染料，则可以直接放入本产品溶液A配制的电泳液中按上述电泳条件电泳(因为溶液A含染料，故不需要额外再加染料)。如果用TBE电泳液配置好的琼脂糖凝胶含EB、SYBR Green或绿如蓝等核酸染料，则可以直接在本产品溶液B配制的电泳液中进行电泳。
5.溶液A配制的胶在TAE或TBE电泳液中电泳：已经用本产品溶液A配置好的琼脂糖凝胶，也可以直接在TBE或TAE电泳液中电泳，电压跟常规TAE或TBE电泳一样。

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