RFT188 2×DNA上样液(变性凝胶电泳)

产品简介
2×DNA上样液(变性凝胶电泳)是高品质的核酸电泳和回收产品,由北京百奥莱博供应,本产品用于生化实验研究等领域,本品质量稳定,价位合理,需要2×DNA上样液(变性凝胶电泳)等核酸电泳和回收产品的客户,请到我公司官网联系我们。...
产品详细介绍
特别提示:包括2×DNA上样液(变性凝胶电泳)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:2×DNA上样液(变性凝胶电泳)
英文名称:2×DNA loading buffer (for denaturating urea gels)
产品货号:RFT188
产品规格:5×1ml
本制品是尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时使用的上样缓冲液,适用于分离短的单链DNA。本缓冲液常用于SSR标记和AFLP、RFLP等基因分型检测。本制品中含有甲酰胺,可以解除DNA的二级结构,保持DNA的单链构型;另外,本制品中还含有溴酚蓝、二甲苯菁两种色素,可以观察电泳的进行情况。溴酚蓝与二甲苯菁在变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速率则随凝胶浓度的改变而不同,见下表:
| 变性胶浓度 | 溴酚蓝 | 二甲苯菁 |
| 5% | 35 bp | 130 bp |
| 6% | 26 bp | 106 bp |
| 8% | 19 bp | 75 bp |
| 10% | 12 bp | 55 bp |
| 20% | 8 bp | 28 bp |
注:bp数是指和色素移动相同距离的DNA片段长度。
使用方法:
使用前,先离心快甩使溶液至管底,以防开盖后造成污染。取本制品与待测DNA样品或DNA Marker等体积混匀,95℃处理5-10分钟,冰上预冷后进行电泳。
注意事项:
1、为了您的安全,使用时请使用一次性手套操作,注意防护。
2、本制品不适用于非变性聚丙烯酰胺凝胶核酸电泳和蛋白电泳。
储存条件:4℃,有效期12个月。
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规格:50次
本系列产品为传统的酶切分子量标准,由单一的质粒DNA或噬菌体DNA经单个限制性内切酶完成消化后,加热灭活而成。每次上样总DNA含量已知,每条带的含量可根据其摩尔数的比值计算出来。本系列产品成分中已经含有上样缓冲液,所以可以直接上样电泳。得到的电泳条带长度准确,明亮清晰,背景较低,稳定性很好。
每次加样量为5μL,可用于相对定量。本系列产品与各种琼脂糖和各种电泳缓冲液兼容。
储存条件:低温运输、-20℃保存,有效期一年。
使用方法:直接上样电泳,每次加样量为5uL。
使用效果:

疑难解答:
a)如对带型要求较高,建议使用0.8-1.5%琼脂糖凝胶(对SuperBuffer-2缓冲液,电压为250-400V)或1.5-2.0%琼脂糖凝胶(对TAE或TBE缓冲液,电压为80V),同时适当延长电泳时间。
b)电泳图象的质量与琼脂糖、电泳缓冲液有关。请采用高质量的琼脂糖,同时要经常更换电泳缓冲液。
名称:DNA上样缓冲液(6X)
货号:YT418
规格:2ml
本品是一种经过适当改良的常规的六倍浓缩的DNA上样缓冲液。本上样缓冲液以溴酚蓝为指示剂,稀释至1X后比重仍然较大,上样时易下沉,且颜色清晰可见。
储存条件:室温,有效期一年。
名称:琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒
货号:WE0168
规格:50次|200次
本试剂盒采用硅基质膜技术和试剂配方,通过独特的离心吸附柱快速的结合DNA-洗涤-洗脱步骤即可从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化100bp-10 kb的DNA片段,溶胶速度快,每个吸附柱zuì高可吸附10μg的DNA,同时有效去除引物、核苷酸、酶、矿物油、琼脂糖等杂质。纯化回收的DNA纯度及浓度高,完整性好,回收率高,可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 | 200次 |
| Buffer PG | 25ml | 100ml |
| Buffer PS | 15ml | 60ml |
| Buffer PW(浓缩) | 10ml | 50ml |
| Buffer EB | 10ml | 30ml |
| 离心吸附柱DM及收集管 | 50套 | 200套 |
产品特点:
1、快速简单:操作步骤少,简单三步即可获得即用型DNA。
2、回收率高:硅基质膜技术和试剂配方保证每次zuì大量回收到纯度高的目的DNA。
3、处理量大:每个离心吸附柱每次zuì多可吸附的DNA量为10μg。
自备试剂:无水乙醇,异丙醇。
实验前准备及重要注意事项:
1、次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
2、使用前请检查Buffer PG,如果出现结晶或者沉淀,可在37℃水浴中放置3-5分钟,即可恢复澄清。
3、电泳时zuì好使用新的电泳缓冲液,避免影响电泳和回收效果;如下一步实验要求较高,请尽量使用TAE电泳缓冲液。
4、切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。
5、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少,洗脱体积越少,回收率越低。
6、将水浴锅预热至50℃。
7、Buffer PG中含有pH指示剂,当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色,此时DNA才能够有效的与膜结合,当pH值偏高时溶液的颜色变为桔红色和紫色,需要进行调整。
8、所有离心步骤均可室温下进行。
操作步骤:
1、将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分),放入干净的离心管(自备)中,称量计算凝胶重量(提前记录离心管重量)。
注意:若胶块的体积过大,可将胶块切成碎块。
2、向胶块中加入1倍体积Buffer PG(如凝胶重为100 mg,其体积可视为100μl,依此类推)。
3、50℃水浴温育,其间每隔2-3分钟温和地上下颠倒离心管,待溶胶液为黄色,以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块,可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟直至胶块完全溶解。
注意:
1)凝胶完全融解后胶溶液为黄色,可进行后续操作;若胶溶液为桔红色或紫色,可向胶溶液中加10-30μl 的3 M醋酸钠(pH 5.0),将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作。
2)胶块完全溶解后zuì好将胶溶液温度降至室温再上柱,吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。
4、(可选步骤)当回收片段<300 bp时,应加入1/2胶体积的异丙醇,上下颠倒 混匀(如凝胶重100 mg,则加入50μl的异丙醇)。
5、柱平衡:向已装入收集管中的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS,13000rpm(~~~16200×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6、将步骤3或4所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中,室温放置2分钟,13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
注意:吸附柱容积为750μl,若样品体积大于750μl 可分批加入。
7、向吸附柱中加入450μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
注意:如果纯化的DNA用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序),建议加入Buffer PW静置2-5分钟再离心。
8、重复步骤7。
9、13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱放到一个新的1.5ml离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加50μl Buffer EB,室温放置2分钟。13000rpm离心1分钟,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意:
1)为了提高DNA的回收量,可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中,室温放置2分钟,13000rpm离心1分钟。
2)洗脱体积不应小于30μl,体积过少会影响回收效率。
3)回收大于10 kb的DNA片段时,Buffer EB应在50℃水浴中预热,可增加回收效率。
备注:本试剂盒也适用于PCR产物的纯化回收。在PCR反应液中加入等体积的BufferPG,充分混匀(对于回收小于150bp的小片段可将溶液的体积增加到3倍以提高回收率)接上述步骤5进行后续操作。
储存条件:室温(15~30℃)。
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