MTTXXXXX TaqMan microRNA定

TaqMan microRNA定量PCR试剂盒由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研试验，我公司专注于核酸扩增(PCR)产品的研发、生产和供应，为您提供的TaqMan microRNA定量PCR试剂盒质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括TaqMan microRNA定量PCR试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：TaqMan microRNA定量PCR试剂盒
英文名称：TaqMan microRNA qPCR Kit
产品货号：MTTXXXXX
产品规格：20μl×100次

探针法作为microRNA定量研究的金标准，具有高特异性、高灵敏度的。Biorab的TaqMan miRNA定量PCR试剂盒，采用特异性的正向miRNA引物和接头引物进行PCR扩增，检测荧光基团采用FAM标记的TaqMan探针。使用该试剂盒可以高特异性、高灵敏度的检测低至100个细胞的miRNA分子，并可区分相似度高的miRNAs。Biorab的TaqMan miRNA定量PCR试剂盒多达一万余种，试剂盒编号为MTTxxxxx，每一个mircoRNA分子对应一个检测试剂盒（包含特异性的TaqMan探针、正向引物、反向引物、定量试剂）。

特别说明： 如您研究的miRNA不在我们的TaqMan microRNA qPCR Kit列表(点击下载)之中，请登录www.mirbase.org进行miRNA查询，并来信告知Accession No.和序列，我们将在2～3周内完成试剂盒的定制。

TaqMan microRNA定量PCR试剂盒原理图：


产品组成：

组分	100T×20μl
5×TaqMan qPCR Mix	400μl
50×ROX Reference Dye	200μl
20×miRNA TaqMan Assay	100μl

储存：请置于-20℃，可保存2年；避免反复冻融。

检测效果和应用实例：

1．高灵敏度（zuì高可到0.1fM级水平)


2．高特异性，有效区分单碱基差异


3．应用实例


内参基因可选择使用：
1．TaqMan RNU6B miRNA 定量 PCR 试剂盒（货号：MTT01501）适用于人、鼠等哺乳动物组织、细胞样品；
2．TaqMan hsa-miR16 miRNA 定量 PCR 试剂盒（货号：MTT01511）适用于来源于人、鼠全血样品。

操作方法：

1．配制反应体系根据机型选择步骤A或B
步骤A：需要添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR 仪，包括：ABI 7000/7300/7500/7900 等。按照如下组分配制 20μl PCR 反应体系：

5×TaqMan qPCR Mix	4μl
50×ROX Reference Dye	0.4μl
20×miRNA TaqMan Assay	1μl
cDNA 模板	1～2.5μl
ddH2O	Up to 20μl

注意：cDNA 模板来自于 TaqMan miRNA 反转录产物。
步骤B：无需添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR 仪，包括：LightCycler（Roche)； MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad)；Line-Gene(杭州博日)等。按照如下组分配制 20μl PCR 反应体系：

5×TaqMan qPCR Mix	4μl
20×miRNA TaqMan Assay	1μl
cDNA 模板	1～2.5μl
ddH2O	Up to 20μl

注意：cDNA 模板来自于 TaqMan miRNA 反转录产物。

2．进行 Real-Time PCR 反应通常采用两步法，程序如下：

Stage 1：	95℃	15分钟
Stage 2：	95℃	10s
	60 ℃	60s	40cycles

收集信号采用FAM 染料通道，反应结束后确认 Real-Time PCR的cDNA 样品和 NTC 阴性对照的扩增曲线。


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名称：双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)
货号：BTN91202
规格：50次
本产品是经过精心优化的、基于MMLV 逆转录酶和Taq DNA聚合酶的双酶一管式RT-PCR试剂盒，它含有除模版RNA和其专一性引物以外的所有RT-PCR试剂，包括MMLV 逆转录酶、Taq DNA聚合酶、RT-PCR缓冲液等，可以在同一反应管内完成RNA→cDNA→PCR反应(RT-PCR反应)。

产品特点：
1.一管式完成RT-PCR反应，避免样品交叉污染。
2. 即开即用，用户不需要单独准备RT-PCR所需的各种试剂。
3. 主要成分只有两个RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix，将加样步骤减少到zuì低，大降低了加样误差，增加了可重复性。
4. 使用范围广，适用于从病毒RNA 到人RNA的各种RNA 模板。
5.高灵敏度，每个RT-PCR 体系zuì低可以检测200拷贝的RNA分子，可扩增的模版RNA的zuì长达2000nt。
6. 所得RT-PCR产物可以直接用于AT克隆。

试剂盒组成：

成分	规格
双酶一管式RT-PCR Buffer(2×)	750μl
MMLV-Taq Mix	100μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：所有离心管用前zuì好全部短暂离心几秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一个30μL 体系的RT-PCR 为例，如果体积不同，各成分用量需要适当调节。
1.在一干净的无RNase的PCR管中，先加入下列成分：

成分	阴性对照	样品
RNA模板(自备，分下面三种情况)	无	见下
总RNA	无	100-500ng
或poly(A)mRNA	无	10-500ng
或体外转录得到的专一RNA	无	0.01 pg-500ng
RNA特异性引物一(自备)	终浓度300nM	终浓度300nM
RNA特异性引物二(自备)	终浓度300nM	终浓度300nM
探针(仅对Realtime RT-PCR)	终浓度200nM	终浓度200nM
RNase-free水	补到13μL	补到13μL
双酶一管式RT-PCR Buffer(2×)	15μl	15μl
MMLV-Taq Mix	2μl	2μl

注：通常初次使用本试剂时，可用引物浓度300nM，探针浓度200nM进行实验，根据实验结果具体情况，在200～800nM 范围内调整引物浓度，在50～400nM 范围内调整探针浓度以达到zuì佳检测效果。引物、探针、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整，同时增减DEPC 水用量，保证总反应体积不变即可。
2. 轻柔混合均匀后放入PCR 仪中进行RT-PCR。
3. 设定RT-PCR反应条件时，一般将RT的条件设定成42℃，30 钟，后接94℃变性5分钟，然后进入PCR循环(PCR参数将根据自备引物的Tm 值由用户自行决定注)、zuì后72℃，5分钟。对Realtime PCR，在复性步骤设置荧光检测，检测通道：FAM/HEX/VIC/ROX/CY5
4. RT-PCR结束后取5-10μL电泳检查。

注意事项：
1. 使用已校准的移液器，选用一次性PCR反应管、离心管、tip 头等进行样本处理及配液等操作，所有用具应不含DNA酶和RNA酶。
2.引物、探针设计过程中应尽可能避免发夹结构、二聚体等现象的发生，探针的位置尽可能靠近上游引物，PCR 目标片段zuì好小于200bp，尽可能在150bp以内。
3. 实验样品尽可能新鲜，提取过程应严防RNA酶污染及操作不当导致的RNA 降解。
4. 使用本产品时建议对RT-PCR扩增条件、引物浓度和样品用量进行调整，选择zuì适当的引物浓度、样品浓度和PCR扩增条件。
5. 本产品使用前应在室温充分融解，并用漩涡震荡器充分混匀。
6. 统一配液后分装以减少加样误差，每次实验应设置阴性对照。
7. 禁止标记PCR反应管，避免外源性荧光信号干扰。
8. PCR反应管中不能有气泡，否则会产生非特异的荧光信号。若有气泡，可先用手指将气泡弹破，然后再低速离心消除。
9. 实时荧光PCR 仪器连续进行实验时，zuì好间隔一小时以上再使用。
10. 实时荧光PCR 仪需经常校正和清洁载样板板孔。
11. 若使用Roch LightCyclerTM荧光PCR 仪，应将毛细管放在专门套管中，以便分装反应体系和加入待检样品。前述操作完毕应低速离心数秒再将毛细管垂直缓慢放入样品架，以免折断；若发生折断，应小心取出，用专用小毛刷擦拭干净后方可进行扩增。
12. 实验室应严格分区，避免PCR产物污染。

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货号	名称	规格
BTN70906	NTP溶液(10mM)	0.5mL
BTN131181	EDTA溶液	1mL
YT377	富含GC PCR Buffer	2ml
YT389	dNTP套装(100mM)	4×50μl
WE0100	PCR Mix(含染料)(滴瓶装)	5ml
WE0101	Taq DNA Polymerase	500U|2500U|10000U

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