WE0164 高纯质粒大提试剂盒

高纯质粒大提试剂盒的品牌是百奥莱博，是优质的DNA提取纯化产品，本制品用于科学研究，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多高纯质粒大提试剂盒等DNA提取纯化产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括高纯质粒大提试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高纯质粒大提试剂盒
英文名称：PlaPure Maxi Extraction Kit
产品货号：WE0164
产品规格：10次

  本试剂盒提供一种简单、快捷、的提取质粒的方法，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方，通过离心吸附柱在高盐状态下专一的结合溶液中的质粒DNA，经过两步洗涤，一步洗脱，zuì大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的DNA可直接用于PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer P1	125ml
Buffer P2	125ml
Buffer P3	125ml
Buffer PB	30ml
Buffer PW(浓缩液)	50ml
Buffer EB	30ml
RNase A(10 mg/ml)	2ml
吸附柱DQ及收集管	10套
离心管(50ml)	10个

自备试剂：无水乙醇，异丙醇。

实验前准备及重要注意事项：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2～8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1 中，混匀，置于2–8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
3、次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请先检查Buffer P2 、Buffer P3、Buffer PB是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清(请勿剧烈晃动Buffer P2)。
5、注意不要直接接触Buffer P2 和Buffer P3，使用后应立即盖紧盖子。
6、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
7、所有离心步骤均可在室温下进行。

操作步骤：
1、取150ml过夜培养的菌液加入离心管(自备)中，12000×g离心3分钟收集细菌，尽量吸弃全部上清。
注意：质粒拷贝数较低或>10 kb时，可以使用更多菌液通过二次离心将菌体沉淀收集到同一个离心管中，同时后续所加试剂Buffer P1、P2及P3的量需按比例加倍。所加试剂的量必须能够充分裂解菌体，菌体过多、裂解不充分都会降低质粒的提取效率。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入12ml Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，使提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入12ml Buffer P2，温和地上下颠倒混匀6-8次，充分混匀使菌体裂解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。并且此步骤所用时间应不超过5分钟，避免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入12ml Buffer P3，立即上下颠倒混匀6-8次，充分混匀，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。12000×g离心10分钟。
注意：Buffer P3 加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
5、取上清加入新的离心管(自备)中，向上清中加入11ml异丙醇，上下颠倒混匀。
6、将步骤5中的混合溶液转移到已装入收集管的吸附柱DQ中。12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：吸附柱的zuì大容积为15ml，所以第5步中所得溶液分多次过柱。如果离心机转子倾角较大时，建议加入吸附柱的溶液体积不超过10ml，以防发生漏液现象。
7、向吸附柱中加入2.5ml Buffer PB，12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入10ml Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液。
9、重复步骤8。
10、将吸附柱重新放回收集管中，12000×g离心5分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
11、将吸附柱置于一个新的收集管中，向吸附膜的中间部位加入1-3ml Buffer EB，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
3)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Buffer EB在65-70℃水浴预热，适当延长吸附和洗脱的时间，可以增加提取效率。

储存条件：室温(15～30℃)

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名称：一管式植物DNA提取试剂盒
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本试剂盒是一管式超快植物叶片和种子基因组DNA提取试剂，得到的产物可以直接用于PCR。整个过程简单快速，尤其适合于大规模的PCR筛选。

产品特点：
1.快速，整个过程只需要15分钟左右，不需要液氮对植物组织进行冰冻、机械处理、纯化或者DNA沉淀。
2.一管式，在一个试管内完成所有操作，不容易交叉污染，。
3.裂解液可以直接用于PCR，剩余样品可以在4℃保存一月以上。
4.便于高通量和自动化，适合于科研单位、海关和企业对叶片和种子进行大规模的PCR筛选。
5.适用于大多数植物叶片和种子。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	5ml
溶液B	5ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
准备工作：溶液A有少量絮状物，用前zuì好37℃水浴10分钟使其溶解。

1.在0.5mL塑料离心管加入0.1mL溶液A。
2.将直径约为0.5-0.7cm(或面积相当的其他形状)的植物叶片直接加到溶液A中。叶片样品可以用直径为6毫米的办公用打孔器获得，叶片不需要捣碎。如果使用种子，需要先将种子敲碎，然后取一碎片(约1/4粒豌豆大小)直接使用。
3.95℃保温10-15分钟。如果保温时间不够，容易产生非特异扩增。
4.加入0.1mL溶液B，用手摇晃约10次混匀。
5.不离心而直接取上清液作为模版进行PCR，模板的体积占PCR体积的1/10为宜。
6.剩余样品可以放4℃保存。
 注意:本产品提取的DNA不能用电泳方法检测。

疑难解答：
Q：为何PCR没有扩增产物？
A：1.可能是植物的PCR抑制剂浓度较高，建议用TE将上清液稀释5-10倍后再扩增。
2.建议使用已经优化好的PCR扩增条件。
3.建议使用百奥莱博PCR抑制物清除剂。
Q：用本产品是否跟Sigma的Extrac-N-Amp PCR Kit一样含有PCR试剂？
A：本产品不含PCR试剂，但用户可以选购百奥莱博的植物专一性PCR试剂盒(含植物专一性引物)或即用型PCR试剂盒(不含植物专一性引物)。

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