ZN1526 细胞凋亡检测试剂盒III

细胞凋亡检测试剂盒III(FITC)由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的，细胞凋亡检测试剂盒III(FITC)是我司众多优质细胞凋亡与增殖之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括细胞凋亡检测试剂盒III(FITC)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细胞凋亡检测试剂盒III(FITC)
产品货号：ZN1526
产品规格：20T

保存条件：-20℃冰冻保存一年。
工作原理：
在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡，其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚，时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的染色质或DNA 被切割，出现单链或双链缺口，并产生与 DNA 断点数目相同的3’-OH 末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以将地gāo辛标记的dUTP(DIG-dUTP)标记至 3’-OH 末端，DIG-dUTP 结合在 DNA 断点部位，可以通过生物标记的抗地gāo辛抗体(Anti-DIG-Biotin)反应后，再结合链酶亲和素-荧光素 FITC(SABC-FITC)。FITC 在 490-495nm 激化，在 520-530nm 发射荧光，呈黄绿色。凋亡的细包核呈黄绿色，从而可以在显微镜下观察到着色的凋亡细胞。
试剂盒内容：
1．标记缓冲液(Labeling Buffer)1ml
2．末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)20μl
3．DIG-dUTP(×20)20μl
4．封闭液(Blocking Reagent)4ml
5．生物素化抗地gāo辛抗体(× 100)20μl
6．SABC-FITC(× 100)20μl
7．Proteinase K(×200)50μl
8．抗体稀释液 4ml
阳性对照片2张
用户自备试剂：
1．多聚赖氨酸或APES。
2．0.01M TBS,PH7.5(配法:1L 双蒸馏水中加入 8.5 克氯化钠,1.2 克 Tris和 0.45—0.5ml 纯乙酸。)
3．DAPI 染色液
4．水溶性封片剂或抗荧光衰减封片剂。
操作步骤：
1．样品处理
(1)玻片预先用多聚赖氨酸或APES 进行处理。
(2)细胞涂片和冰冻切片：zuì重要的是及时固定。用 4%多聚甲醛/0.01M PBS(PH7.0---7.6)室温下固定 30—60分钟。0.01M PBS洗2分钟×2次。蒸馏水洗涤 2分钟×2次。
(3)组织：有条件时应及时固定。常规 4%多聚甲醛/0.01M PBS(PH7.0---7.6)或10%中性缓冲福尔马林固定 4 小时以上，石蜡包埋。切片常规脱蜡入水(脱蜡务必干净)。
2．标本片加 0.01M TBS 1:200 新鲜稀释 Proteinase K 37℃消化 1—15分钟,0.01M TBS洗2分钟×3次。(细胞涂片和冰冻切片一般不消化或消化 10—60秒钟。新鲜石蜡切片消化 5-10分钟。陈旧石蜡切片消化 10-15分钟)。
3．标本片加标记缓冲液(Labeling Buffer)20μl/片,以保持切片湿润。按每张切片取 TdT和 DIG-d-UTP 各 1μl，加入 18μl标记缓冲液中，混匀。甩去切片上多余液体后加标记液，20μl/片。置样品于湿盒中，37℃标记2 小时。
4．0.01M TBS洗2分钟×3次。
5．加封闭液 50μl/片，室温 30分钟，甩掉封闭液，不洗。
6．用抗体稀释液 1：100 稀释生物素化抗地gāo辛抗体：(取1ml抗体稀释液加生物素化抗地gāo辛抗体10μl)，混匀后 50μl/片加至标本片上。置样品于湿盒中，37℃反应30分钟。
0.01M TBS洗2分钟×3次。
7．用抗体稀释液 1：100 稀释 SABC：取 1ml 抗体稀释液加 SABC 10μl，混匀后 50μl/片加至切片。37℃反应 30分钟。0.01M TBS洗5分钟×4次。
8．必要时可用DAPI染色液轻度复染，蒸馏水洗。抗荧光衰减封片剂封片(可用甘油代替)。荧光显微镜观察。
结果判定：
细胞核中有黄绿色颗粒者为阳性细胞，即凋亡的细胞。
注意事项：
1．试剂盒严格-20℃存放。
2．初用时如试管底部无可见的试剂，在离心机离心5分钟，使试剂沉至管底。
3．检测过程中切勿使样品干涸。

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货号	名称	规格
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名称：Caspase 1 活性检测试剂盒
货号：YT138
规格：20次|100次
本试剂盒是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中caspase 1酶活性或纯化的caspase 1酶活性的试剂盒。本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测时，除标准曲线外可以检测20个样品。

试剂盒组分：
裂解液——————8ml
检测缓冲液——————8ml
Ac-YVAD-pNA(2mM)———200μl
pNA(10mM)——————200μl

Caspase是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 1也称interkeukin 1b conberting enzyme(ICE)，有时被写作caspase-1或caspase 1，是caspase家族中可以剪切IL-1b前体蛋白或IL-18前体产生相应成熟的细胞因子的caspase。Caspase 11可以剪切45kD的caspase 1前体蛋白，产生20kD和10kD的片段，这两个片段可以形成异源二聚体(heterodimer)，并进一步由两个异源二聚体形成四聚体。Caspase 1可以通过剪切其凋亡Bcl-XL来调节细胞凋亡，并通过其对一些细胞因子前体的剪切来调控相关免疫反应。

本caspase 1活性检测试剂盒是基于caspase 1可以催化底物Ac-YVAD-pNA(acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp p-nitroanilide)产生黄色的pNA(p-nitroaniline)，从而可以通过测定吸光度来检测caspase 1的活性。pNA在405nm附近有强吸收。

试剂盒中提供了caspase 1催化产生的黄色产物pNA，可以作为定量caspase 1酶活性的标准品。

注意事项：

1. 须自备可以测定A405或A400的酶标仪或容量不超过100μl的分光光度检测杯及相应分光光度计。优先考虑测定A405，如有困难可以测定A400。
2. Ac-YVAD-pNA需尽量避免反复冻融，请注意适当分装。
3. 测定蛋白浓度需Bradford蛋白浓度测定试剂盒(YT034)，可向百奥莱博订购。建议样品用水稀释1倍后再用Bradford法测定蛋白浓度，以降低DTT对蛋白浓度测定的干扰。
4. pNA(中文名为4-硝基苯胺)有毒，请注意小心防护。pNA(10mM)在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
5. 本试剂盒的裂解液可以和百奥莱博的其它caspase活性检测试剂盒的裂解液通用，即本试剂盒裂解液制备的蛋白样品可以用于百奥莱博其它caspase活性检测试剂盒的检测。

储存条件：-20℃。

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