BTN131083 Ribo-SPIA cDNA扩增

北京百奥莱博供应的Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒用于科学研究，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒
英文名称：Ribo-SPIA RNA Amplification Kit
产品货号：BTN131083
产品规格：20次

血液样品和各种临床样品(包括组织检查、FFPE切片或少量细胞样品)都是基因表达分析和诊断的常见材料，但这些样品通常数量有限，质量不高，还没法进行第二次取样。所以得到足够RNA量供后续试验是一个非常棘手的瓶颈。为解决这一问题，本公司根据Ribo-SPIA技术，开发了本产品。Ribo-SPIA技术的核心是利用DNA/RNA嵌合引物，以带polyA尾巴的mRNA为模板进行逆转录并得到双链cDNA、RNase H不间断地在cDNA第1链中的RNA部分产生裂口，DNA聚合酶以此裂口为基础进行链取代聚合反应，产生cDNA单链。

产品特点：
1.，能线性扩增1000-10000倍，能用5-100 ng总RNA模板扩增得到5μg左右的单链cDNA(扩增的cDNA主要来源于总RNA中的mRNA)。
2. 步骤简单方便，扩增在恒温进行，只需要4个小时，不需要特殊仪器设备。
3. 保真性好，保持RNA样品中各分子的相对丰度。
4. 尤其适用于RNA产量和质量都不高的样品。
5.扩增得到的单链cDNA能直接用于各种后续试验，包括qPCR、芯片分析、杂交反应等。
6. 本产品足够做10次双链cDNA的合成，20次SPIA扩增。

试剂盒组成：

成分	规格
cDNA一链合成缓冲液	40μl
MMLV逆转录酶	10μl
cDNA二链合成缓冲液，5×	160μl
cDNA二链合成酶混合液20×	40μl
SPIA RT引物	40μl
SPIA反应液，5×	320μl
SPIA扩增引物	320μl
SPIA酶混合液	120μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为1年。

使用方法：

一：样品RNA的制备
本产品不含RNA相关试剂，用于Ribo-SPIA扩增的每个批次的RNA样品zuì好先做一个预实验。总RNA样品的浓度必须在1-20ng/μL，一次RIBO-SPIA所需总RNA的量为1ug。也可以使用mRNA，一次Ribo-SPIA所需总mRNA的量为5-100 ng。过低则需要浓缩，过高则需要用无RNase的水稀释。RNA必须经过DNase处理，不能含DNA污染。微量提取时不能使用核酸类的助沉剂。注意：本产品只能扩增含带polyA尾巴的RNA，不能扩增DNA和不含polyA尾巴的RNA。

二：一管式双链cDNA的合成
1.在0.5mL PCR管中，按下表配制双链cDNA合成反应。
注意：zuì好每次实验设置一个阴性对照组，在此对照中用超纯水替代自备的mRNA或总RNA:

成分	用量
自备mRNA或总RNA	4μL mRNA(5-100ng)或4μL总RNA(1ug)
SPIA RT引物MTA3 20uM	1μl
65℃，5分钟后室温放置2分钟，短暂离心后放4℃
cDNA一链合成缓冲液	4μl
MMLV逆转录酶	1μl
轻柔吹打混匀后得到10μL的反应体系。42℃保温90分钟合成链cDNA。结束后70℃保温15分使酶变性，zuì后4℃放置，然后加入下列成分，得到80μL反应体系。
超纯水	50μl
cDNA二链合成缓冲液	16μl
cDNA二链合成酶混合液	4μl
轻柔吹打混匀后，短暂离心，16℃保温2小时合成cDNA第二链，然后75℃ 15分灭活酶，zuì后4℃放置待用

三：SPIA扩增
2.在0.5mL PCR管中，按下表配制20μL的SPIA反应体系。注意：zuì好设置两个阴性对照组，在此两个对照中分别用超纯水替代SPIA引物和cDNA双链反应液。

成分	用量
cDNA双链反应产物	40μL(来于上步)
SPIA扩增引物10uM	16μl
SPIA反应液，5×	16μl
超纯水	42μl
94℃20秒后50℃放置复性待用
SPIA酶混合液	6μl
轻柔吹打混匀后得到120μL反应体系，50℃扩增60分钟，zuì后4℃放置

四：SPIA扩增产物的检测
3. 取5μL SPIA扩增产物进行PAGE电泳检测。标准的反应结果是产生长度在200-2000bp之间的产物。
4. 如果产物将用于PCR定量，则可以不经过纯化直接使用，如果需要用于芯片杂交和浓度测定，则需要按常规的方法纯化cDNA以便去除残留的dNTP和引物。
5. OD检测纯度和浓度。在OD260的波长下测样品你给的光吸收。由于扩增产物是单链DNA，故1OD260=33ug/mL。
6. 所得DNA可以放-20℃长期放置。

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