Y13229 链亲和素

产品简介
北京百奥莱博供应的链亲和素(9013-20-1)(生物技术级,17u/mg)用于科研试验,本品质量稳定,价位合理,需要链亲和素(9013-20-1)(生物技术级,17u/mg)等蛋白类产品的客户,请到我公司官网联系我们。...
产品详细介绍
特别提示:包括链亲和素在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:链亲和素
英文名称:Streptavidin
产品货号:Y13229
产品规格:1mg|5mg|10mg
CAS:9013-20-1
介绍:链亲和素(SA)是阿维丁链霉菌(Streptomyces avidinii)表达的一种小分子蛋白。本制品为127AAzuì佳核心结构,每分子SA结合4个生物素分子,比活性12~15U/mg。SA与禽类亲和素(Avidin,AV)相比特异性更强,与生物素结合后半衰期长达6h,而AV半衰期仅为1h。由于SA不含糖基且等电点接近中性,因此SA在检测应用中具有比AV更低的非特异性背景。
用途:本制品已广泛应用于制备SA-偶联酶制剂(如SA-HRP,SA-AP等),SA-偶联荧光素(即荧光染料,如SA-FITC,SA-Cy2,SA-Cy3等)、SA-偶联磁珠等,进而参与酶联免疫吸附检测(ELISA)、免疫组化、亲和色谱填料、含StrepTagII标签(8-AA寡肽)的蛋白纯化、生物传感器、生物纳米微球、预靶向制药研究、生物芯片被料等生物技术领域。
优点:高亲和力,高偶联效率。
注意事项:
1.冻干粉溶解后应避免反复冻融,建议分装成小包装后分别冻存。
2.冻干粉中含20mMNa2CO3 pH9.5的缓冲体系,若用于包被,酶标可以直接使用。若用于胶体金,zuì好调节pH或透析后使用。溶解后立即使用效果zuì好,不能4℃长期存放。
3.若用于ELISA包板,胶体金烘金,硝酸纤维素膜上用SA划线后需要烘干保存,包被液或缓冲液中需加入20%蔗糖作为活性保护剂。
储存条件:-20℃
外观:冻干粉
用途:Applications for enzyme-labeled (HRP,AP) streptavidin:Enzyme immunoassays (EIA),including enzyme-l
敏感性:对热敏感,易吸潮
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本品为TRITC标记的鬼笔环肽,染色反应特异性强,对比性高,具有比Actin抗体更好的染色效果,适合用作F-actin的定性和定量检测。另外,经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性,适用性广泛。
别名:罗丹明鬼笔环肽
分子式:C60H70N12O13S2
分子量:1231.4
性状:紫色粉末(冻干粉)
鬼笔环肽(Phalloidin)是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏的环状七肽毒素,以高亲和力(Kd= 20 nM)选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin,而不会与单体肌动蛋白G-actin结合,通常用来标记组织切片,细胞培养物或无细胞体系中的F-actin,从而对F-actin进行定性和定量分析。另外,鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维,无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞,按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略,染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此,鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白(Actin)抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小,直径约12-15Å,分子量<2000 Daltons,未标记肌动蛋白(Actin)的许多生理特性都得以维持,比如,同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能发生反应;鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质;以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。
鬼笔环肽(Phalloidin)的结合阻止丝状肌动蛋白(微丝)的解离,稳定微丝结构,从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度(CC)降至<1µg/mL,因此,可用作一种聚合促进剂。此外,鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。
1. 工作液准备
本品以溶于甲醇的 20µM 储存液形式提供,总量为 300µl。按照 100 nM 的工作液浓度来换算,可制备总量为 60ml 的工作液。建议收到产品后,根据单次使用量,对母液进行小量分装,-20℃避光冻存,一年稳定。开始实 验前,使用 1×PBS 缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为:80~200nM。现配现用。
2. 染色步骤
1) 细胞爬片生长 24h,使其密度达到 50%汇合度。
2) 吸掉培养液,37℃预热的 1×PBS(pH 7.4)清洗细胞 2 次。
3) 使用溶于 PBS 的 4%甲醛溶液进行细胞固定,室温固定 10min。 注意:避免固定剂中含有甲醇成分,因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。
4) 室温条件下,用 PBS 清洗细胞 2~3 次,每次 10min。
5) 室温条件下,用丙酮(≤-20℃)脱水或者用 0.5% Triton X-100 溶液透化处理 5min。
6) 室温条件下,用 PBS 清洗细胞 2~3 次,每次 10min。
7) 取 200µl 配制好的 TRITC 标记鬼笔环肽工作液,覆盖住盖玻片上的细胞,室温避光孵育 30min(通常情况下, 4℃~37℃孵育皆可)。 注意:为了降低背景,可于 TRITC 标记的鬼笔环肽工作液内加入 1% BSA;另外,孵育过程中为了避免溶液挥 发,可将盖玻片转移到一个密封的容器内。
8) 用 PBS 清洗盖玻片 3 次,每次 5min。
9) 使用 200µl DAPI 溶液(浓度:100 nM)对细胞核进行复染,约 30s。
10) 用 PBS 清洗盖玻片,然后倒置在已经滴有一滴 Fluoromount-GTM 水溶性封片剂的载玻片上。使用纸巾轻轻檫 掉多余封片剂,然后用指甲油封片。此法制备的标本玻片可置于 4℃避光保存,通常 6 个月内可继续做 F-actin 染色分析。 注意:也可以直接使用含有 DAPI 的抗荧光淬灭封片剂合并步骤 9)10),简化步骤。
11) 荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察,选择 TRITC 激发/发射滤片(Ex/Em=540/570nm)和 DAPI 激 发/发射滤片(Ex/Em=364/454nm)。
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