BTN11-2371 牛腺病毒3型PCR检测试剂盒

牛腺病毒3型PCR检测试剂盒(荧光定量法)由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，仅用于生物化学研究方面，我公司专注于病毒PCR检测试剂盒产品的研发、生产和供应，为您提供的牛腺病毒3型PCR检测试剂盒(荧光定量法)质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括牛腺病毒3型PCR检测试剂盒(荧光定量法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：牛腺病毒3型PCR检测试剂盒(荧光定量法)
英文名称：Bovine Adenovirus Type 3 qPCR Kit
产品货号：BTN11-2371
产品规格：50次

本产品是根据BAV-3核酸序列的保守区pol蛋白酶设计引物，定制的一种检测BAV-3的荧光定量PCR试剂盒。牛血清的质量控制标准中有一项重要的指标是病毒的检测。比较常见的易感染奶牛和肉牛的病毒如DNA病毒：牛腺病毒3型（Bobine Adenovirus Type 3，BAV-3），主要引起牛的呼吸道和肠道疾病，其主要特征为肺炎、肠炎、结膜炎和多发性关节炎，是犊牛死亡的重要原因之一。其易感和潜伏性给畜牧业及其贸易带来严重的经济损失，同时，给细胞培养以及相关基础研究带来一定的问题。因此，病毒的快速检测是控制牛血清质量的前提，除了传统的培养传代观察细胞病变，血清学诊断技术外，我们在这里引入荧光定量PCR的方法，来快速检测血清样品中是否污染有BAV-3。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板即可使用。
2. 快捷，整个PCR过程只要一小时。
3. 灵敏度达达100copies/reactlon水平。
4. 荧光PCR mix中含第二代饱和型荧光染料，效果好于SYBR Green I。
5. 密封体系，大降低了假阳性。
6. 本产品跟各种荧光PCR仪器兼容。

产品组成：

组分	编号	规格(50T)
2×荧光PCR Mix	BTN90408	1.5mL
BAV-3专一性引物一	yw1277	100uL
BAV-3专一性引物二	yw1278	100uL
BAV-3标准品1.27×10E11拷贝/uL）	yw12791280	40uL
DNA稀释液	BTN121206-10	10mL
超纯水	BTN100935	1mL

保存条件：-20℃保存，有效期一年。

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人类细小病毒B19是英国科学家Cossart及其同事于1977年在筛查无症状乙肝患者血清时无意发现的，根据生化及分子生物学特点将其归为细小病毒科。由于其是在B组的第19号样品中发现的，故命名为B19病毒。zuì初人们认为B19是人群中普遍存在而不致病的一种病毒，但后来发现，B19感染是引起传染性红斑、慢性溶血性贫血患者发生再障危象、免疫抑制患者慢性贫血、孕期流产、死胎的病原体。
本试剂盒适用于检测人全血等标本中的人细小病毒(B19)DNA，适用于人细小病毒(B19)感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考。
【检验原理】
本试剂盒用一对人细小病毒B19特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对人细小病毒B19核酸进行体外扩增检测，用于对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
名称 数量 规格
核酸提取液 2管 1.5ml
酶液 1管 50μl
B19反应液 1管 1.0ml
B19阳性质控品 1管 50μl
阴性质控品 1管 250μl
说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。
【储存条件及有效期】
-20℃避光保存、运输、避免反复冻融，有效期12个月。
【适用仪器】
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
【标本采集】
1. 适用标本类型：人全血；
2. 标本采集：
血液:无菌注射器抽取外周血1-2ml注入EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管；
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
【使用方法】
1. 样品处理(样本处理区)
1.1 样本前处理
取抗凝血下层(细胞层)50μl，加入200μl ddH2O使其胀破。
1.2 DNA提取
1) 取上述处理好的标本40μl，加入等体积核酸提取液，100℃恒温处理10分钟，13000 rpm离心5分钟，取上清液转移至新的1.5ml EP管，-20℃保存；
2) DNA的提取也可以采用北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(离心柱提取法)，请严格按照试剂盒说明书进行操作。
2. 试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1
管阴性对照+1管阳性对照)，每测试反应体系配制如下表：
试剂 B19 反应液 酶液
用量 20μl 1μl
3. 加样(样本处理区)
将步骤1提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μl，加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4. PCR扩增(核酸扩增区)
4.1 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；
4.2 推荐循环参数设置：
步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号
1 1 cycle 94℃ 2min 否
2 40 cycle 94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
反应体系为25ul；荧光通道检测选择：FAM通道。
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定
1) 设置基线(baseline)：一般情况下，对ABI 7500、7700等仪器设为6-15cycle，对PE5700设为3-15cycle,对MJ Research Option2设为6-12cycle。特殊情况可对基线适当调整。
2) 设置阈值(threshold):以阈值线刚超过阴性对照扩增曲线(无规则的噪音线)的zuì高点。
5.2 结果判断
1) 阳性：检测样本Ct值小于等于35.0，且曲线有明显的指数增长期；
2) 可疑：检测样本Ct值大于35.0且小于40.0，重复一次实验，如果Ct值仍小于40.0，且曲线有明显的指数增长期，为阳性，否则为阴性；
3) 阴性：检测不到样本Ct值或Ct值为40。
6. 对检验结果的解析
实验室环境污染，试剂污染，标本交叉污染会出现假阳性结果；试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果。
7. 质控标准
1) 阴性质控品：扩增曲线无对数生长期或无Ct值显示；
2) 阳性质控品：扩增曲线有明显对数生长期，且Ct值≤32;
以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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