WH0008 土壤DNA提取试剂盒（离心吸附柱

北京百奥莱博供应的土壤DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)用于科学研究，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多土壤DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)等DNA提取纯化产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括土壤DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：土壤DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)
英文名称：Extraction kit for genomic DNA from soil
产品货号：WH0008
产品规格：50次

本试剂盒采用独特的脱腐缓冲液系统，可以将土壤样本中的腐殖酸尽可能的去除，并且配有的玻璃珠可有效破碎土壤样本中的各种复杂成分，保证从土壤中提取基因组DNA的完整性。使用本试剂盒回收的DNA杂质少，完整性好，可直接用于PCR、酶切等其它分子生物学下游实验。

产品特点：
·适用范围广：适用于花坛土、花盆土、农田土、山林土、淤泥、红土、黑土、粉尘等多类土壤环境样本的提取。
·操作便捷：能够集中在相对较短时间内完成实验操作。
·高纯度：与离心柱法纯化相结合，提取的DNA纯度很高，可直接用于下游实验。

提取实例：

土壤基因组DNA提取，起始量：250mg，50μl洗脱，5μl上样，1%琼脂糖凝胶电泳结果。
1、黑龙江凉水自然保护区，黑土
2、广东鼎湖山，红土
3、北京东录山自然保护区，黄土
4、浙江古田山，红土
5、西双版纳补蛙自然，红土
6、实验室粉尘
7、山林土
8、淤泥
9、农田土
10、花盆土
11、花坛土


以提取的土壤基因组为模板，进行PCR，20μl PCR体系采取6μl电泳的结果。
1、黑龙江凉水自然保护区，黑土
2、广东鼎湖山，红土
3、北京东录山自然保护区，黄土
4、西双版纳补蛙自然，红土
5、实验室粉尘
6、山林土
7、花盆土
8、花坛土
9、浙江古田山红土
10、淤泥
11、农田土

试剂盒组成：

组分	50T
缓冲液SA	45ml
缓冲液SC	5 ml
缓冲液HA	15 ml
缓冲液HB	15 ml
缓冲液GF	70 ml
漂洗液PWS	15 ml
1mm研磨珠	15g
洗脱缓冲液TE	15 ml
吸附柱CB3	50个
收集管（2 ml）	50个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下可保存12个月；更长时间的保存可置于2-8℃。在2-8℃保存条件下，若产生沉淀，使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．新采取的土壤样本会得到更高的产率，不同样本在采样前应先查阅相应的zuì佳保存条件。
2．所有的离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。
3．在需要吸取上清液的步骤中应避免吸到沉淀，否则会堵塞吸附柱，并影响产物纯度。
4．漂洗液PWS使用前请参照瓶上标签加入无水乙醇。
5．过量的DNA可能抑制下游PCR反应，遇到这种情况建议将DNA模板进行稀释后试用。

使用方法：
使用前请先在漂洗液PWS中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．取750μl缓冲液SA和0.25 g研磨珠至2 ml离心管中。
2．在上述2 ml离心管中加入土壤样本0.25 g，涡旋混匀15 sec。
3．向样本中加入60 μl缓冲液SC，涡旋振荡10min至样本混匀。
  注意：使用前检查缓冲液SC是否有沉淀，若有沉淀，请在37℃加热至完全溶解后使用。
4．12000rpm（~13400×g）离心1 min。转移上清液（约500 μl)至新的2 ml离心管。
5．加入250 μl缓冲液HA，涡旋5 sec，4℃放置5 min。
6．12000rpm（~13400×g）离心1 min。转移上清至新的2 ml离心管，加入200 μl缓冲液HB混匀，4℃放置5 min。
  注意：转移上清时不要移走沉淀，否则可能降低DNA纯度。
7．12000rpm（~13400×g）离心1 min。转移上清液至新的2 ml离心管，加入1200 μl缓冲液GF颠倒混匀。
  注意：转移上清时不要移走沉淀，否则可能降低DNA纯度。
8．取上一步所得溶液700 μl加入到一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中)，12000rpm（~13400×g）离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
  注意：吸附柱zuì大容量为700 μl，请分多次过柱。
9．向吸附柱CB3中加入500 μl漂洗液PWS （用前请加入无水乙醇)，12000rpm（~13400×g）离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
10．向吸附柱CB3中加入500 μl 70%乙醇，12000rpm（~13400×g）离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
11．12000rpm （~13400×g)离心2 min，倒掉废液。
12．将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100 μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12000rpm （~13400×g )离心2 min，将溶液收集到离心管中。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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名称：白细胞裂解液
货号：BTN130989
规格：250mL
本品为即用型白细胞裂解溶液，可以用于裂解分离纯化好的血液白细胞，用于DNA提取、RNA提取等后续实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(以DNA提取为例)
1. 取新鲜抗凝血5mL，在10mL或15mL的塑料离心管中用红细胞裂解液裂解红细胞(红细胞裂解液有几种配方，用户需要根据所选产品的使用手册进行操作，这里不列出每种的详细步骤)，也可以直接2500rpm离心5分钟后取白细胞层到一新的10mL或15mL的塑料离心管中。
2.在所得的白细胞沉淀中或所得白细胞层溶液中加自备的生理盐水使得白细胞的终体积为2mL。
3. 加1mL的本产品，混匀后55℃ 保温3小时，其间轻轻振摇数次。
4. 加入3mL自备的Tris饱和酚，轻轻震摇5分钟，使得水相和酚相充分分开。
5. 3500rpm离心15分钟，上层水相含DNA，中间白色层为蛋白质，下层为酚相。
6. 将非常粘稠的含DNA的上清液转移到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。
7. 再用Tris饱和酚重复上面的抽提步骤，直到离心后中间层没有白色的蛋白出现为止。
8.在上清液中加入等体积的自备的氯fǎng，轻轻震摇5分钟，3500rpm离心5分钟，转移上清液到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。此步可以除去残留的酚。
9.在上清液中加入0.1倍体积的自备的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)和2倍体积的无水乙醇，轻柔颠倒混匀，将出现絮状的DNA沉淀。
10. 用移液枪头将DNA沉淀挑取出来，转移到1.5mL的塑料离心管中，用75%的乙醇浸泡2次。此操作可以去除DNA中残留的盐离子。
11.转移DNA沉淀到一个1.5mL的塑料离心管中，空气中放置10分钟左右待乙醇挥发后，加入0.5mL自备的TE缓冲液溶解DNA，4℃放置待用。

名称：红细胞裂解液B型(流式细胞分析用)
货号：BTN90309
规格：250mL
本品用于快速裂解哺乳动物全血中的红细胞而基本不破坏白细胞和其他淋巴细胞的完整性和生物学活性。由于红细胞是血液的主要细胞成份，不含DNA和RNA，其所含血红素能抑制PCR反应，所以先用本产品裂解红细胞，再提取基因组DNA或RNA 有助于提高所得样品纯度。

产品特点：
1.可以处理人全血、小鼠全血、脾细胞中的红细胞。
2.，一次处理能裂解80%以上的哺乳动物红细胞，能回收90%左右的白细胞。一般样品zuì多只需要处理两次。
3.扩容性好，可以一次处理多达几十毫升的样品，也可以处理100μL的血液。
4.基于NH4Cl 裂解法，得到的白细胞主要用于流式细胞分析。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
用去离子水将本产品(10×)稀释为1×工作液(1mL 本产品加9mL去离子水)，待温度回到室温或37℃加热到37℃的时候再使用。工作液不能长期放置，只能现配现用。

一．裂解哺乳动物全血中的红细胞
1.离心哺乳动物抗凝血液后弃血浆部分，按每1mL 哺乳动物抗凝血液细胞沉淀加10mL 1×工作液的比例加入红细胞裂解液B型的1×工作液。
2. 轻柔吹打充分混匀。
3.室温放置 15分钟(注意：放置时间不要超过15分钟)。
4. 4℃1000rpm离心10分钟，吸弃红色的上清液。
5. 如果红细胞裂解不完全，可以重复第 1-4 步。
6. 用适当的自备缓冲液(如Hanks溶液)重悬白细胞沉淀。
7. 用于细胞计数和流式细胞分析等后续试验。

二．裂解组织细胞中的红细胞
1. 按标准方法用自备的胰酶将组织消化成单个细胞悬液，离心弃上清。
2. 按 1：10的比例向细胞沉淀中加入红细胞裂解液B型工作液，轻柔吹打均匀。
3.室温放置 15分钟(注意：放置时间不要超过15分钟)。
4. 4℃ 1000rpm离心10分钟，吸弃红色的上清液。
5. 如果红细胞裂解不完全，可以重复第 2-4 步。
6. 用适当的自备缓冲液(如 Hanks溶液)重悬白细胞沉淀。
7. 用于细胞计数和流式细胞分析等后续试验。

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