Y13365 葡聚糖T11

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特别提示：包括葡聚糖T11在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：葡聚糖T11
英文名称：Dextran T11
产品货号：Y13365
产品规格：10g

CAS：9004-54-0
分子式：C₆nH₁₀nO₅n
储存条件：密封阴凉干燥保存
外观：白色结晶或粉末
敏感性：易吸潮

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规格：10ml
谷胱甘肽-琼脂糖凝胶H.P.用于分离纯化谷胱甘肽S-转移酶（GST）标签蛋白、其它来源的谷胱甘肽S-转移酶以及和谷胱甘肽具有亲和作用的蛋白的亲和层析介质。pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。GSTs是一类以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白。

产品参数：
基质：6%琼脂糖凝胶
配基：肝素
颗粒大小：45～165μm
zuì大流速：600cm/h
工作pH：pH3.0～pH12.0
每毫升蛋白结合量：10mg
操作温度：室温
保存条件：贮存于4℃～28℃（保存溶液为20%乙醇）

使用方法：
1．谷胱甘肽树脂的处理：
① 轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。
② 取部分匀浆放入15mL聚丙烯管（每100mL细菌培养物大约需要2mL匀浆）。
③ 4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
④ 在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS，颠倒数次混匀，4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
⑤ 每毫升树脂加入1毫升冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。
2．制备细胞抽提物：
① 每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mL PBS缓冲液中。
② 加入溶菌酶至终浓度为1mg/mL,冰上放置30分钟。
③ 用针筒将10mL浓度为0.2%的TritonX-100强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。加入DNase和RNase至终浓度5μg/mL,4℃振动温育10分钟，4℃ 3000 g离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入DTT至终浓度1mmol/L。
3．纯化融合蛋白：
① 细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和，每100毫升细菌培养物加2mL树脂，于室温轻摇30min。
② 混合物于4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
③ 沉淀中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白。
④ 4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
⑤ 结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱，也可用凝血酶、肠激酶或Xa因子切割，释放靶蛋白。
4．用谷胱甘肽洗脱融合蛋白：
① 沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10min，洗脱树脂上结合的蛋白。
② 4℃以500g离心5分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移至新管中。
③ 重复步骤5和6两次，合并3次上清。蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
④ 在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或Xa因子（根据融合蛋白中的位点选择），每mL树脂加入50单位溶于1mLPBS的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2-16小时。
⑤ 4℃以500g离心5分钟，上清小心移至新管中。（GST仍结合在树脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）
⑥ 10% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。
  试剂配制：谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L还原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)

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