SY0252 低熔点琼脂糖

低熔点琼脂糖(9012-36-6)是高品质的核酸电泳和回收产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于生化实验研究等领域，我公司的低熔点琼脂糖(9012-36-6)品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括低熔点琼脂糖在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：低熔点琼脂糖
英文名称：Low Melting Point Agarose
产品货号：SY0252
产品规格：5g|25g|100g

琼脂糖(Agarose)是纯化的线性半乳聚糖亲水胶体，提取自琼脂或者含琼脂的海藻，结构上是一种线性聚合物，由β-D-吡喃半乳糖(1-4)连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基构成。作为一种凝胶试剂，常用于通过凝胶电泳或者印迹法(如Northern或Southern)来进行日常核酸分析，也适用于蛋白应用，如辐射状免疫扩散(RID)实验。

琼脂糖的基本参数，包括：1)硫酸盐含量，琼脂糖的纯度指标；2)凝胶强度，指施加于凝胶使之断裂的外力；3)胶凝点，指水溶性琼脂糖溶液冷却后形成凝胶时的温度；4)电渗(EEO)，一种液体穿透凝胶的一种电动运动，会干扰分离效率。

低熔点琼脂糖(Low melting point agarose)是经过改良使得成胶温度和熔点更低的琼脂糖，相比于常规琼脂糖，分子筛特性更好，条带清晰度更高。非常适用于小分子量核酸的分离以及电泳后核酸片段的回收(因其约在65.5℃熔化，几乎低于所有核酸分子的熔点)。低熔点琼脂糖凝胶电泳纯化回收的DNA胶条重熔后，可以直接用于制备放射性同位素标记的DNA探针。本品在37℃以下保持流动，适用于凝胶内的酶促反应、组织培养、细胞的克隆和病毒空斑实验等。

产品性质

CAS：9012-36-6
外观：白色或浅黄粉末
凝胶强度(1.5%)：>480 g/cm2
胶凝温度(1.5%)：24-30℃
熔胶温度(1.5%)：≤65.5℃
电渗值(EEO, -mr)：≤0.12
硫酸盐：≤0.15%
DNA/RNA酶(DNase/ RNase)：不含
蛋白酶(Protease)：不含

储存条件：常温。

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BTN3150 RNA电泳液，10× 250mL
BTN3130B 三合一RNA上样液(B型,6X) 1.5mL
BTN3280 电泳级SYBR Green I 50μL
BTN80202 PAGE胶DNA柱式回收试剂盒 50次
WE0210 UltraStain核酸染料 500μl
RFT003 1kb DNA ladder(1000～10000bp) 100T(2×250μl)
RFT024 DNA Marker VII(300～2500bp) 100T(2×250μl)

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名称：一站式DNA尿素-PAGE电泳套装
货号：BTN90317
规格：30次
本品是专门用于DNA 尿素-PAGE电泳的一站式试剂盒。

产品特点：
1.一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。用户不需要单独准备各种成分。
2.可用于DNA 测序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase 保护实验等。
3. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。
4.电泳后可直接用于银染、EB染色等实验。

产品组成：

成分	规格	保存
电泳级尿素	210g	常温
电泳级丙烯酰胺	77.34g	常温
电泳级甲叉双丙烯酰胺	2.67g	常温
10×TBE电泳液	250ml	常温
电泳级TEMED	1.5ml	4℃，避光
电泳级过硫酸铵	1g	常温
2×尿素-PAGE上样液	1ml	-20℃
说明书	1份

储存条件：常温运输，保存条件见上表，有效期一年。

使用方法：

一、PAGE浓度和交联度的选择指南
尿素-PAGE一般推荐用29：1(丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺)的交联度，
在此条件下，DNA片段和zuì适PAGE浓度对应关系如下：

单链DNA长度	zuì佳PAGE浓度	二甲苯青FF迁移率 对应的长度	溴酚蓝的迁移率 对应的长度
50-400nt	8%	160nt	45nt
200-1000nt	5%	260nt	65nt
750-2000nt	3.5%	460nt	100nt

二、制备尿素-PAGE胶
1. 配制尿素-PAGE胶(这是配制100mL胶的用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A：新鲜配制10%的APS(过硫酸铵)：按每0.1 克过硫酸铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP 管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鲜交联度为29:1的40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液(AB溶液，下同)：在装有77.34 g电泳级丙烯酰胺干粉的瓶中加入约120mL自备的去离子水，然后将全部甲叉双丙烯酰胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有毒粉末飘出。甲叉双丙烯酰胺溶解度低，不会溶解在这少量溶液中)。充分摇晃混匀后所得溶液即40%的AB溶液。配制40%而非30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
C：配尿素-PAGE胶：在一个250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去离子水、40%AB溶液和10×TBE缓冲液。丙烯酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

PAGE胶浓度	各成分用量(尿素为克，其余单位是mL)			补水到(mL)
	尿素	40%AB溶液	10×TBE缓冲液
5%	42	12.5	5.0	100
6%	42	15.0	5.0	100
7%	42	17.5	5.0	100
8%	42	20.0	5.0	100
9%	42	22.5	5.0	100
10%	42	25.0	5.0	100
11%	42	27.5	5.0	100
12%	42	30.0	5.0	100

D：搅拌溶解，然后用滤纸过滤。zuì好能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应)，无条件也可以不脱氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速摇匀后倒胶。
F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
G:室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
H: 拔出梳子，用0.5×TEB液冲洗加样孔。

三、样品准备
2. 对一般样品、测序样品、微卫星DNA、AFLP样品、DDRT样品、RPA样品：将样品跟上样液1:1 混合，95℃ 3分钟变性，然后放冰上待用。
3. 对TGGE样品：可以直接上样。

四：电泳
4. 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够0.5×TEB电泳液。
5.预电泳5-30分钟将冰上放置的样品上样。
6.连接电源线，打开电源开关。根据胶的大小选择功率(固定功率可以固定产热，这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压，产热都将随电泳时间而变化，不好控制)。对小胶一般用5-6W 固定功率，大胶用15-25W 固定功率。
7. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理(如银染)。注意：如果银染，必须延长固定时间以便让洗出尿素，否则残留尿素会干扰后面的银染。

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