BTN180301 通用型琼脂糖胶配胶液(20×)

产品简介
通用型琼脂糖胶配胶液(20×)的品牌是百奥莱博,是优质的核酸电泳和回收产品,本制品仅用于生物化学研究方面,我公司专注于核酸电泳和回收产品的研发、生产和供应,为您提供的通用型琼脂糖胶配胶液(20×)质量可靠,批间差小,且价格公道,热切盼望您选购我们的产品。...
产品详细介绍
特别提示:包括通用型琼脂糖胶配胶液(20×)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:通用型琼脂糖胶配胶液(20×)
英文名称:Prestained Gel Buffer,20×,Universal
产品货号:BTN180301
产品规格:250mL
本产品是本公司在百无忧电泳液基础上开发的通用型预染琼脂糖配胶液,含抗水解的核酸染料,用于配制琼脂糖凝胶,也可用于电泳(但不经济)。
产品特点:
1. 预染,含低毒稳定的核酸染料,用户不需要再购买EB、SYBR green I、GelGreen等染料。
2. 稳定,染料不怕光、不怕水、不怕热,故可以常温放置两年,使用效果不衰减。
3. 高,5mL的本产品可以配制100mL 琼脂糖胶,可倒3-4 块mini 胶。
4. 所配制的琼脂糖凝胶跟百无忧电泳液(货号:BTN151103)和TBE 电泳液兼容。
5. 本产品配制的琼脂糖凝胶适用于各种DNA 长度的电泳。
6. 用本产品配制的凝胶电泳得到的DNA片段不影响后续的DNA 胶回收和DNA 连接等反应。
产品组成:
| 组分 | 编号 | 规格 |
| 配胶液(通用型),20× | BTN180301 | 250mL |
保存条件:常温保存和运输,有效期两年。若低温放置则有结晶析出(主要是染料在高盐低温条件下容易析出),请摇匀后用于稀释,稀释20 倍后染料晶体会自然溶解。
自备试剂:去离子水、琼脂糖
使用方法:
将本产品用去离子水稀释20 倍(5mL 本产品加95mL 去离子水),混匀后直接用于配制琼脂糖胶,琼脂糖胶的浓度根据要分离的DNA片段大小决定。胶凝固后直接用于电泳,电泳液可以使用1×百无忧电泳液,也可以使用1×TBE 电泳液,按常规的电压电泳即可。
关联产品:
百无忧电泳液100×(货号:BTN151103)
TBE 电泳液10×(货号:BTN90313)
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名称:一站式DNA尿素-PAGE电泳套装
货号:BTN90317
规格:30次
本品是专门用于DNA 尿素-PAGE电泳的一站式试剂盒。
产品特点:
1.一站式,即开即用,用户不需单独准备各种成分,十分方便。用户不需要单独准备各种成分。
2.可用于DNA 测序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase 保护实验等。
3. 安全,免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。
4.电泳后可直接用于银染、EB染色等实验。
产品组成:
| 成分 | 规格 | 保存 |
| 电泳级尿素 | 210g | 常温 |
| 电泳级丙烯酰胺 | 77.34g | 常温 |
| 电泳级甲叉双丙烯酰胺 | 2.67g | 常温 |
| 10×TBE电泳液 | 250ml | 常温 |
| 电泳级TEMED | 1.5ml | 4℃,避光 |
| 电泳级过硫酸铵 | 1g | 常温 |
| 2×尿素-PAGE上样液 | 1ml | -20℃ |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,保存条件见上表,有效期一年。
使用方法:
一、PAGE浓度和交联度的选择指南
尿素-PAGE一般推荐用29:1(丙烯酰胺:甲叉双丙烯酰胺)的交联度,
在此条件下,DNA片段和zuì适PAGE浓度对应关系如下:
| 单链DNA长度 | zuì佳PAGE浓度 |
二甲苯青FF迁移率 对应的长度 |
溴酚蓝的迁移率 对应的长度 |
| 50-400nt | 8% | 160nt | 45nt |
| 200-1000nt | 5% | 260nt | 65nt |
| 750-2000nt | 3.5% | 460nt | 100nt |
二、制备尿素-PAGE胶
1. 配制尿素-PAGE胶(这是配制100mL胶的用量,配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A:新鲜配制10%的APS(过硫酸铵):按每0.1 克过硫酸铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP 管中,摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B:新鲜交联度为29:1的40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液(AB溶液,下同):在装有77.34 g电泳级丙烯酰胺干粉的瓶中加入约120mL自备的去离子水,然后将全部甲叉双丙烯酰胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有毒粉末飘出。甲叉双丙烯酰胺溶解度低,不会溶解在这少量溶液中)。充分摇晃混匀后所得溶液即40%的AB溶液。配制40%而非30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
C:配尿素-PAGE胶:在一个250mL的三角瓶中,先按下表的用量加入去离子水、40%AB溶液和10×TBE缓冲液。丙烯酰胺单体溶液具有神经毒性,一定要戴手套操作。
| PAGE胶浓度 | 各成分用量(尿素为克,其余单位是mL) | 补水到(mL) | ||
| 尿素 | 40%AB溶液 | 10×TBE缓冲液 | ||
| 5% | 42 | 12.5 | 5.0 | 100 |
| 6% | 42 | 15.0 | 5.0 | 100 |
| 7% | 42 | 17.5 | 5.0 | 100 |
| 8% | 42 | 20.0 | 5.0 | 100 |
| 9% | 42 | 22.5 | 5.0 | 100 |
| 10% | 42 | 25.0 | 5.0 | 100 |
| 11% | 42 | 27.5 | 5.0 | 100 |
| 12% | 42 | 30.0 | 5.0 | 100 |
D:搅拌溶解,然后用滤纸过滤。zuì好能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应),无条件也可以不脱氧。
E:加入500μL 10%APS和100μL TEMED,迅速摇匀后倒胶。
F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶,插入梳子。
G:室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
H: 拔出梳子,用0.5×TEB液冲洗加样孔。
三、样品准备
2. 对一般样品、测序样品、微卫星DNA、AFLP样品、DDRT样品、RPA样品:将样品跟上样液1:1 混合,95℃ 3分钟变性,然后放冰上待用。
3. 对TGGE样品:可以直接上样。
四:电泳
4. 将凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽中加入足够0.5×TEB电泳液。
5.预电泳5-30分钟将冰上放置的样品上样。
6.连接电源线,打开电源开关。根据胶的大小选择功率(固定功率可以固定产热,这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压,产热都将随电泳时间而变化,不好控制)。对小胶一般用5-6W 固定功率,大胶用15-25W 固定功率。
7. 终止电泳,取出凝胶进行后续的处理(如银染)。注意:如果银染,必须延长固定时间以便让洗出尿素,否则残留尿素会干扰后面的银染。
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