WE0239 T4 DNA连接酶

产品简介
T4 DNA连接酶是高品质的工具酶产品,由北京百奥莱博供应,本产品用于科研目的,本品质量稳定,价位合理,需要T4 DNA连接酶等工具酶产品的客户,请到我公司官网联系我们。...
产品详细介绍
特别提示:包括T4 DNA连接酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:T4 DNA连接酶
英文名称:T4 DNA Ligase
产品货号:WE0239
产品规格:100U|500U
T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的,催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接,还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接,以及线性DNA的自身环化。
产品组成:
| 组份 | 100U | 500U |
| T4 DNA Ligase,5 U/μl | 20μl | 100μl |
| 10×Ligation Buffer | 150μl | 750μl |
| 50%PEG Solution | 150μl | 750μl |
实验前准备及重要注意事项
1、T4 DNA Ligase的zuì终用量不要超过推荐的用量,否则影响连接效率。
2、PEG可以大提高平末端的连接效率,我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。
3、为了提高转化效率,建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油,比较粘稠容易挂壁,建议使用之前短暂离心将液体收集到管底,取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。
使用方法:
一、粘性末端的连接:
1、按以下体系配制反应液:
| 组份 | 20μl体系 | 终浓度 |
| 线性载体DNA | Xμl | 20-100ng |
| 插入DNA片段 | Yμl | 插入片段:载体1:1-5:1 |
| 10×Ligation Buffer | 2μl | |
| T4 DNA Ligase,5 U/μl | 0.2μl | 1 U |
| ddH2O | 补充至20μl |
2、涡旋震荡,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件:22℃孵育10分钟。
4、瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底,65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意:如需电击转化,推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。
二、平末端的连接:
1.反应体系:
| 组分 | 20μl体系 | 终浓度 |
| 线性载体DNA | Xμl | 20-100ng |
| 插入DNA片段 | Yμl | 插入片段:载体1:1-5:1 |
| 10×Ligation Buffer | 2μl | |
| T4 DNA Ligase,5 U/μl | 1μl | 5 U |
| 50%PEG Solution | 2μl | 5% |
| ddH2O | 补充至20μl | 20μl |
2、涡旋震荡,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件:22℃孵育1小时。
4、瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底,65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意:如需电击转化,推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。
三、线性DNA的自身环化:
1、反应体系:
| 组分 | 50μl体系 | 终浓度 |
| 线性载体DNA | Xμl | 5-50ng |
| 10×Ligation Buffer | 5μl | |
| T4 DNA Ligase,5 U/μl | 1μl | 5 U |
| ddH2O | 补充至50μl | 50μl |
2、涡旋震荡,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件:粘性末端22℃孵育10分钟;平末端22℃孵育1小时。
4、瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底,65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意:如需电击转化,推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。
储存条件:-20℃。
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名称:BamHI限制性内切酶
货号:SV0084
规格:50KU|50KU|10KU|10KU|5KU
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 75%
BalbBuffer 2.1:
BalbBuffer 3.1:
CutSmart Buffer:
特性:
重组酶、省时酶。
反应条件:
BalbBuffer 3.1,37℃。
浓度:
20,000和100,000units/ml。
甲基化敏感性:
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
注意事项:
甘油浓度>5% 条件下可能出现星号活性。
名称:BsaWI限制性内切酶
货号:SV0168
规格:1250U|250U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 10%
BalbBuffer 2.1:
BalbBuffer 3.1: 50%
CutSmart Buffer:
特性:
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液,60℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度:
10,000units/ml。
37℃ 时活性20%。
甲基化敏感性:
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
注意事项:
BsaWl是Betl的完全同裂酶。
名称:BsrI限制性内切酶
货号:SV0233
规格:5KU|1KU|500U
在不同反应缓冲液的活性
BalbBuffer 1.1: <10%
BalbBuffer 2.1: 50%
BalbBuffer 3.1:
CutSmart Buffer: 10%
特性
省时酶。
反应条件
BalbBuffer 3.1,65℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度
10,000units/ml
37℃ 时活性
20%。
甲基化敏感性
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
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