HR8198 酵母核提取试剂盒

酵母核提取试剂盒适用于从各种酵母中提取完整的具有活性的细胞核。提取过程简单方便。制备的酵母核纯度高，保持天然活性，绝少交叉污染。试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：● 离心机 ● 振荡器 ● 涡旋混匀器 ● 移液器 ● PBS（pH7.4，10mM，1×）

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酵母核提取试剂盒

 

产品编号：HR8198

产品组成：

储存条件：

2-8℃保存，有效期1年。

产品简介：

酵母核提取试剂盒适用于从各种酵母中提取完整的具有活性的细胞核。提取过程简单方便。制备的酵母核纯度高，保持天然活性，绝少交叉污染。

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

● 离心机 ● 振荡器 ● 涡旋混匀器 ● 移液器 ● PBS（pH7.4，10mM，1×）

酵母核提取试剂盒使用注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

● 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

● 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

● 离心机转速有相对离心力(RCF,×g)和每分钟转速(RPM)两种表示方式,有些离心机设置有RPM和×g显示切换,但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：

G=r×1.118×10^-5×rpm²(r为有效离心半径,即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度,单位为厘米)例如：转速为3000rpm,有效离心半径为10cm,则相对离心力(RCF,×g)为=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2(×g)。

酵母核提取试剂盒使用方法：

1、酵母培养物，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。

2、用PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

【注】：

● 在1000×g离心5分钟。

3、每100μL酵母沉淀物中加入200μL酵母核蛋白提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。

4、在1000×g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集酵母沉淀。

5、用500μL PBS洗涤酵母一次，离心收集菌体。

【注】：

● 在1000×g离心5分钟。

6、酵母沉淀物中加入300-500μL酵母蛋白提取液B，充分混匀。

【注】：

● 根据酵母细胞量调整提取液用量，一般加菌体体积的2-5倍均可。

● 按酵母菌体体积每100μL或100mg湿重菌体加入300-500μL提取液。

7、在37℃或室温条件下轻微振荡45-60分钟。

【注】：

● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

8、在1000×g条件下离心5-10分钟，收集沉淀，弃上清。

9、用500μL PBS洗涤沉淀。离心收集沉淀。

【注】：

● 在1000×g，离心10分钟。

10、沉淀中加入500μL酵母核提取液C，高速涡旋15 秒混匀，然后在振荡器上振荡15-30分钟。

【注】：

● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

11、再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，1000×g条件下离心10分钟，弃上清，沉淀即为酵母细胞核。

12、用适量试剂D重悬酵母核，置4℃保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

● 也可根据下游实验需要用其他缓冲液保存。

● 需要再次回收酵母核时，在1000×g，离心10分钟收集沉淀即可。

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