HR0023 组织/细胞质蛋白提取试剂盒

组织/细胞质蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从细胞和动物组织制备胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1 小时内完成。制备的胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研

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组织/细胞质蛋白提取试剂盒

 

产品编号：HR0023

产品组成：

组织/细胞质蛋白提取试剂盒储存条件：

蛋白提取液、磷酸酶抑制剂2-8℃保存，蛋白酶抑制剂-20℃保存，有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

● 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

产品说明：

组织/细胞质蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从细胞和动物组织制备胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1 小时内完成。制备的胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。

本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒（相关产品HR0165）。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品HR0389）。

产品特点：

● 使用方便，从细胞/组织提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

● 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。

● 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

● 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

● 蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。

● 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

适用样本：

● 细胞 ● 组织

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

● 离心机 ● 振荡器 ● 匀浆器/Dounce匀浆器 ● 涡旋混匀器 ● 移液器

● PBS ● 蛋白定量试剂盒

组织/细胞质蛋白提取试剂盒使用注意事项：

● 预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

● 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

● 如果试剂盒不能短时间用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

● 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

使用方法：

细胞胞浆蛋白提取：

1、提取液制备：

每500μL冷的胞质蛋白提取液A 加入2μL蛋白酶抑制剂混合物和2μL磷酸酶抑制剂，充分混匀。

【注】：

● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制剂可以一次加入。

● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

2、取5-10×10⁶个细胞，在4℃，500×g力条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3、用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4、每20μL体积细胞沉淀（约20mg，2×10⁶个细胞）中加入150-200μL冷的提取液A，高速涡旋振荡混匀或吹打混匀，置2-8℃条件振荡20-30分钟。

【注】：

● 提取液A处理后细胞体积应减少，否则延长提取液A振荡处理时间。

● 根据预实验结果，可以稍微减少试剂A的用量，以提高获得的胞浆蛋白样品的浓度。

● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

5、然后在4℃，12000×g条件下离心10分钟。

6、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞质蛋白。

7、将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。

● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

组织胞浆蛋白提取：

1、提取液制备：

每500μL冷的胞浆蛋白提取液A加入2μL蛋白酶抑制剂混合物和2μL磷酸酶抑制剂，充分混匀。

【注】：

● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制剂可以一次加入。

● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

2、取适量组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，每20mg组织中加入150-200μL冷的提取液A，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。

3、将匀浆液吸出，置2-8℃条件振荡20-30分钟。

【注】：

● 提取液A处理后细胞体积应减少，否则延长提取液A振荡处理时间。

● 根据预实验结果，可以稍微减少试剂A的用量，以提高获得的胞浆蛋白样品的浓度。

● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

4、再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，12000×g力条件下离心10分钟。

5、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞质蛋白。

6、将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。

● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

常见问题分析：

● 蛋白浓度低？

处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

● 细胞裂解速度慢？

为了充分保证提取得到的蛋白的活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。

● 用什么方法定量蛋白？

建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性吗？

本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

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