HR8200-50T 酵母内质网提取试剂盒

酵母内质网提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种酵母样品中提取内质网。提取过程简单方便。本试剂盒不能用于冷冻样品的内质网提取。本试剂盒可以用于完整内质网提取相关的实验，也可以用于下游内质网蛋白提取等实验。

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酵母内质网提取试剂盒

产品编号：HR8200

产品组成：

酵母内质网提取试剂盒储存条件：

2-8℃保存，有效期1年。

【注】：

● 酵母洗涤液长期不用时-20℃保存。

产品简介：

内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。

酵母内质网提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种酵母样品中提取内质网。提取过程简单方便。

本试剂盒不能用于冷冻样品的内质网提取。

本试剂盒可以用于完整内质网提取相关的实验，也可以用于下游内质网蛋白提取等实验。

本试剂盒需要使用高速离心，没有高速离心的条件时，可以选择低速离心法内质网提取试剂盒。

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

● 离心机 ● 振荡器 ● 移液器 ● 离心机 ● 涡旋混匀器 ● PBS ● 100μm细胞筛

使用注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

● 要求离心力50000×g 的离心，没有条件的话可以采用30000×g -50000×g 离心力，最好能达到45000×g 左右。最小离心力需要保证30000×g。

● 如果需要回收所有光面内质网小泡，最后一个离心步骤的离心力需要提高到100000×g力。

● 离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM）两种表示方式，有些离心机设置有RPM 和×g 显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：g=r×1.118×10-5×rpm²（r为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2（×g）

酵母内质网提取试剂盒使用方法：

1、酵母培养物，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。

2、用PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

【注】：

● 在1000×g离心5 分钟。

3、每100μL体积或100mg湿重酵母沉淀物中加入400μL 酵母内质网提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。

【注】：

● 酵母数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。

4、在1000×g条件下离心5-10分钟，收集酵母沉淀。

5、用300μL酵母洗涤液D洗涤酵母一次，离心收集酵母。

6、酵母沉淀物中加入500μL酵母内质网提取液B，充分混匀后。

【注】：

● 根据酵母细胞量调整提取液用量，一般加菌体体积的2-5倍均可。

● 按酵母菌体体积每100μL或100mg湿重菌体加入250-500μL提取液。

7、在37℃或室温条件下轻微振荡60-90分钟。

【注】：

● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔10分钟用移液器吹打混匀。

● 不同酵母样本需要的时间差异较大，根据下游细胞裂解的难易程度调整，如果下游试剂C处理后沉淀没有明显减少，需要延长此步骤处理时间。可以延长至2小时。

8、在2000×g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集沉淀。

9、沉淀用300μL酵母洗涤液D洗涤两次。离心收集沉淀。

10、在沉淀中加入400μL酵母内质网提取液C，充分混匀，然后在振荡器上振荡10-30分钟。

【注】：

● 用振荡器/摇床的较低转速，保持提取液有轻微晃动即可。

● 没有振荡器的话，在4℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

● 试剂C 处理后沉淀应减少，否则延长处理时间。

11、在4℃，500×g条件下离心5 分钟，弃沉淀，收集上清。

12、将上清吸入另一干净离心管。

13、在4℃，11000×g条件下离心20分钟。弃沉淀，收集上清。

14、将上清在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，收集沉淀。

【注】：

● 如果条件允许，可将离心力加大到100000×g，有利于提高光面内质网小泡回收率。

● 如果用大的离心转头，液体量太少不好离心的话，可以添加PBS增加液体量。

● 没有高速离心的条件时，可以选择低速离心法内质网提取试剂盒（相关产品HR9110）。

15、在沉淀中加入200-400μL内质网保存液E，混匀。

【注】：

● 也可不用试剂盒中的内质网保存液重悬，根据下游实验需要选择合适的缓冲液重悬内质网或直接用于下游实验。

● 需要提取内质网蛋白时可以直接在沉淀中加入适量蛋白裂解液进行裂解。

16、在4℃，50000×g条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。即得到酵母内质网样品。

17、根据下游实验需要，将沉淀用相应的缓冲溶液重悬。置冰箱备用或直接用于下游实验。

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