HR8040 植物种子蛋白提取试剂盒(高淀粉含量样本用)

植物种子蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种高淀粉含量的植物种子样品中提取可溶性蛋白。如水稻、荞麦、玉米、小麦等。提取过程简单方便。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

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植物种子蛋白提取试剂盒(高淀粉含量样本用)

 

产品编号：HR8040

试剂盒组成：

储存条件：

2-8℃保存，有效期1年。

植物种子蛋白提取试剂盒(高淀粉含量样本用)产品简介：

植物种子蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种高淀粉含量的植物种子样品中提取可溶性蛋白。如水稻、荞麦、玉米、小麦等。提取过程简单方便。

本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D 电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒（相关产品HR8041）。也可以将最后样品除盐后再用于2D 电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品HR0389）。

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

● 离心机 ● 振荡器 ● 涡旋混匀器 ● 移液器 ● PBS（pH7.4，1×） ● 蛋白定量试剂盒

使用注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

使用方法：

1、将适量待提取种子样本剥皮，用PBS或纯水洗涤3次。

2、将样本置研钵液氮充分研磨。

【注】：

● 没有液氮研磨条件也可直接用蛋白提取液A研磨。

3、加入1mL蛋白提取液A充分混匀。移入离心管。

【注】：

● 一般每1mL蛋白提取液A处理种子干粉量最大不超过体积400μL或干重400mg。

4、将离心管置振荡器轻轻振荡30分钟-60分钟。

5、在4℃，15000×g离心20分钟。

6、收集上清，弃沉淀。

7、在900μL上清液体样本中加入100μL蛋白提取液B，充分混匀。

8、冰浴或4℃冰箱静置30分钟以上。

【注】：

● 可以4℃静置过夜。

9、在4℃，15000×g条件下离心15分钟。

【注】：

● 使用离心机能达到的最大离心力。

10、小心移除上层清液丢弃，留沉淀。

【注】：

● 蛋白量较少的样品可能很难看到明显的沉淀，只在离心管底部薄薄一层。

11、将离心管倒置在吸水纸上干燥离心管。

12、加入200μL蛋白提取液C到离心管中。

13、在4℃，15000×g以上条件下离心15分钟。弃上清，留沉淀。

14、将离心管倒置在吸水纸上干燥离心管。

【注】：

● 或开盖敞口静置至液体完全干燥。

15、用40μL-100μL蛋白提取液D溶解蛋白沉淀，充分混匀。

【注】：

● 或者加入20μL-50μL 1×蛋白Loading Buffer，煮10min直接用于下游实验。

16、在4℃，10000×条件下离心10分钟。

17、收集上清用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。

● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

常见问题分析：

● 蛋白浓度低？

部分植物种子蛋白丰度极低，在条件允许的情况下，需要尽可能加大种子样本的上样量。

处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

● 植物种子蛋白提取试剂盒(高淀粉含量样本用)用什么方法定量蛋白？

建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂E 中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

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