HR0233-50T 动物线粒体提取试剂盒

本试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的线粒体提取。最好用于新鲜样品的线粒体提取，由于冷冻样品的线粒体在冻存过程中可能被破坏，提取回收率可能大幅降低。本试剂盒提取的线粒体可以用于各种线粒体功能研究、蛋白提取等下游应用。

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适用样本：

● 组织 ● 细胞

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 移液器 ● 离心机 ● 振荡器 ● Dounce匀浆器 ● 涡旋混匀器 ● PBS缓冲液

注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

● 最好使用标准Dounce匀浆器匀浆，如果没有标准Dounce匀浆器，用普通1mL玻璃匀浆器匀浆也可，但是线粒体回收率会下降。

使用方法：

细胞线粒体提取：

1、取1-2×10⁷个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；

2、用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

【注】：

● 用1000×g力离心5分钟。

3、细胞沉淀中加入500μL-1mL冷的试剂A重悬，置冰上5分钟。

4、用 Dounce匀浆器匀浆30-40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。

【注】：

● 先用Dounce匀浆器的松型槌初步匀浆10-20次，再用紧型槌匀浆20-30次。

● 每上下一个来回为一次。

5、将上清吸入另一预冷的干净离心管，弃沉淀。

6、将上清在4℃，1000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。

7、将上清在4℃，11000×g力条件下离心15分钟。弃上清，收集沉淀。

8、在沉淀中加入400μL冷的试剂B，轻轻混匀。

9、在4℃，11000×g以上条件下离心15分钟。

10、弃上清，沉淀用线粒体保存液重悬。

【注】：

● 也可不用试剂盒中的线粒体保存液重悬。

● 根据实验需要选择合适的缓冲液重悬线粒体或直接用于下游实验。

11、即得到线粒体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

组织线粒体提取：

1、取50-100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。

2、用手术剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。

【注】：

● 用1000×g里离心5分钟。

3、沉淀中加入500μL-1mL冷的试剂A混匀，置冰上5分钟。

4、用Dounce匀浆器匀浆30-40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。

【注】：

● 先用Dounce匀浆器的松型槌初步匀浆10-20次，再用紧型槌匀浆20-30次。

● 每上下一个来回为一次。

5、将上清吸入另一预冷的干净离心管，弃沉淀。

6、将上清在4℃，1000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。

7、将上清在4℃，11000×g力条件下离心15分钟。弃上清，收集沉淀。

8、在沉淀中加入400μL冷的试剂B，轻轻混匀。

9、在4℃，11000×g以上条件下离心15分钟。

10、弃上清，沉淀用线粒体保存液重悬。

【注】：

● 也可不用试剂盒中的线粒体保存液重悬。

● 根据实验需要选择合适的缓冲液重悬线粒体或直接用于下游实验。

11、即得到线粒体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

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