HR8632-500μL 细胞质染色试剂CDCFDA

CDCFDA的膜转运和细胞内水解的精确动力学与细胞功能有关，因此CDCFDA标记可用于通过流式细胞术或荧光显微镜监测细胞。CDCFDA染料标记细胞的荧光强度在细胞系之间差异很大，可能是由于细胞内酯酶活性的差异导致。

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检测方法：

● 流式细胞仪 ● 荧光显微镜 ● 激光共聚焦

样本类型：

● 悬浮细胞 ● 贴壁细胞

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 流式细胞仪或荧光显微镜或激光共聚焦 ● 离心机 ● PBS缓冲液 ● HBSS(无酚红)

使用注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 染色浓度根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。

● CDCFDA母液易水解，建议分装保存，分装后用封口膜密封管口，再用锡箔纸包裹，最后和干燥剂一起用塑料袋密封，≦-20℃冷冻保存。

● CDCFDA工作液应现配现用，不能提前配制，因为CDCFDA吸水会分解，影响染色效果。

● CDCFDA易被水解，在水溶液中会变质。母液请在使用过程中避免接触水。工作液在标记细胞的过程中和水接触是在许可的时间范围内的。

● CDCFDA溶解液在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以37℃水浴片刻至全部融解后使用。

● CDCFDA标记细胞仅需5-15分钟即可完成。对于不同细胞，最佳标记时间需自行摸索。正式实验前，建议先做几个孔摸索染色浓度和加入CDCFDA试剂后的培养时间。

● 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

● 以下染色步骤仅供参考。以实际需要使用。也可以原位染色。

使用方法：

1、根据需要检测的细胞样品数，用HBSS缓冲液将CDCFDA母液500-4000倍稀释。

不同的细胞需要根据预实验结果确定最佳染色浓度。如果荧光强度弱，可以适当提高CDCFDA的终浓度。如果背景太高，可以适当降低CDCFDA的终浓度，请摸索条件找到最佳浓度。

【注】：

● 也可以用PBS 等缓冲液或相应的无血清培养基稀释染料母液至所需浓度。

● 开始实验前，使用HBSS 缓冲液或无血清培养基稀释CDCFDA到需要的工作浓度。工作浓度为根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，一般染色终浓度500-4000倍稀释。

● 一般起始浓度按500-1000倍稀释即可。

● 为了降低过度加载染料导致的潜在背景和细胞毒性，在不影响实验结果的前提下应尽可能低浓度染色。

● 工作液现配现用。

2、将待测细胞用染色工作液重悬，至细胞浓度大约10⁷/mL。

【注】：

● 贴壁细胞也可原位染色。

3、在37℃培养箱中避光孵育15-30分钟。

4、离心后去上清，收集细胞，用PBS或无血清培养基洗涤细胞1-2次，最后加入PBS或无血清培养基重悬细胞。

5、取500μL细胞悬液，用激光共聚焦/流式细胞仪检测。激发波长为488 nm，最大发射波长为526 nm。

可以在荧光显微镜下直接观察标记效果，也可以在培养适当时间后再用流式细胞仪检测细胞，或用于其他特定实验目的的细胞荧光示踪。标记的细胞也可以用于活体动物的移植，并用荧光进行示踪。标记的细胞呈绿色荧光。

6、随后还可按照细胞的正常培养方法进行培养。

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