HR8262-200T 细胞耗氧率检测试剂盒

R01与O2的这种反应是非破坏性且完全可逆的,R01无细胞毒性,是化学稳定的,惰性的,水溶性的和细胞不渗透的,不能透过完整的细胞膜。因此还可同时与糖酵解,线粒体膜电位JC-1,ROS和细胞ATP、LDH等检测的试剂结合使用,进行多参数检测。用R01进行细胞外耗氧检测方法及其简单,不需要适用特殊的仪器设备,只需要荧光酶标仪之类的荧光读

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产品特点：

● 广泛适用于各种体外模型；不再局限于单层细胞,还能测定悬浮细胞、微生物和特定的3D培养物；

● 简单的“混合-检测”方案允许使用多种其他分析试剂盒进行多参数分析；

● 可逆转,能够观察耗氧量的瞬态和长时间变化；

● 可适配多种荧光酶标仪以及标准96孔和384孔；

● 以高通量的形式方便地测量；

● 无需等待专用设备空闲所需的实验室时间,也无需大额资金专用设备投入。

产品用途：

● 线粒体功能和细胞代谢研究；

● 测量活细胞中的线粒体活性；

● 研究各种处理对细胞耗氧量的影响；

● 研究基因修饰对细胞耗氧量的影响；

● 研究呼吸和线粒体功能；

● 探究氧含量与细胞代谢变化之间的联系；

● 直接评估药物处理的线粒体毒性。

适用样本类型：

● 细胞：贴壁细胞/悬浮细胞/透化细胞；

● 分离的线粒体；

● 3D培养物；组织；

● 分离的酶；

● 微生物：细菌/酵母/霉菌。

荧光检测模式：

● 基础模式：荧光强度测定；

● 标准模式：时间分辨荧光测量（TR-F）；

● 高级模式：荧光Lifetime calculation（FLIM,Autofluorescence Lifetime Imaging system,Dual-read Ratiometric TR-F measurement）

【注】：

● 以上取决于酶标仪的类型和仪器设置,不是所有仪器可用。

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

● 荧光酶标仪（须配备相应的波长过滤器和温度控制器。时间分辨荧光功能的读板机佳（如果有）） ● 离心机 ● PBS/HBSS（无酚红） ● 对照试剂（选配,非必须）：Glucose Oxidase,Antimycin A,FCCP ● 黑色透明底荧光专用培养板

使用注意事项：

● 螺旋盖微量管装试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。

● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

● 以下操作以96孔细胞培养板为例。其他培养容器或装置请根据实际情况调整试剂用量和检测方法。各试剂等比例调整即可。O₂荧光探针终浓度25倍稀释最佳。
● R01探针的信号变化直接取决于所测量细胞类型的细胞呼吸速率,建议尽可能使用每孔高的细胞密度作为起点,并根据需要减少细胞数量。

● 并非所有细胞类型都消耗足够用于检测的氧气。

● 必须用荧光培养专用的透明底黑色培养板,减少检测时各孔之间的光互相干扰。

● 用于测定的所有仪器试剂溶液耗材均需37℃预热。

● 添加氧气封闭液时注意避免产生气泡。

● 尽可能使用多通道移液器添加试剂。

● 如果药物有红色荧光（如阿霉素等）需要换液,不含培养基和待测药物,用HBSS货PBS体系检测,在无血清无酚红环境检测。

● 建议设定FCCP处理的阳性对照样本。

关于仪器设置：

● 温度对检测有较大影响。有条件的话,务必使用配有温度控制的酶标仪。

● 常规的荧光信号强度测量,使用基于单色仪或基于过滤器的酶标仪,最佳激发波长使用450-460nm,发射波长使用586-600nm。可根据实际机器和样本选择信号最强的波长。

● 具有检测增益参数（PMT,Parameters）的通常设置为中或高。

● 使用bottom read读数和top read读数均可,基于不同的细胞模型,建议在预实验时两种读数模式均尝试下,看哪种的趋势更加明显。

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