HR0089-50T 全血总蛋白提取试剂盒

全血总蛋白提取试剂盒适用于从各种抗凝或非抗凝全血样本中提取总蛋白。本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

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产品特点：

1、使用方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟。

2、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

3、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

4、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 离心机 ● 振荡器 ● 涡旋混匀器 ● PBS ● 蛋白定量试剂盒

使用注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

● 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

● 蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。

● 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

● 本试剂盒提取的是全血总蛋白，含所有高丰度的白蛋白等。电泳前可以蛋白稀释液稀释至约5μg/μL。

● 电泳加Loading Buffer后水煮时，蛋白液有时会变得非常粘稠，可以用65℃保温10分钟代替沸水煮。

● 对于某些目的蛋白在血清中含量很低的情况，或者目的蛋白与白蛋白分子量相近的情况，可能需要先去除白蛋白，需要根据情况选择。白蛋白等去除试剂盒需要自备。

使用方法：

1、提取液制备：

每500μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

【注】：

● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

● 蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶、磷酸酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。

● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。

2、取300μL全血样品，加入300μL蛋白提取液，充分混匀后，在4℃条件下振荡20-40分钟。

【注】：

● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

3、在4℃，14000×g条件下离心10分钟。

4、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到全血总蛋白。

【注】：

● 一般沉淀只是离心管底部薄薄一层，没有明显团块。

● 整个红色液体即是全血蛋白上清液。

5、将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA法进行蛋白定量。

● 蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

● 全血样品蛋白浓度较高，需要稀释后用于下游实验。一定要根据蛋白定量的情况稀释至合适的浓度再用于电泳等下游实验应用。

常见问题分析：

● 用什么方法定量蛋白？

建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性吗？

本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

● 电泳蛋白煮样品后成胶状？

全血蛋白样品浓度极高，需要稀释到合适的浓度再进行下游检测。

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