HR0275-50mL 细菌裂解液(免超声)

本裂解液提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（货号HR0389）。

北京百奥莱博科技有限公司是一家专业的生物试剂销售公司。公司主要经营血清、抗原、抗体等生物试剂产品，可以为您提供专业的技术服务，以优良的价格、优质的服务、优先的理念，满足客户的各方面的需求，与国内多家企业、单位建立了良好的长期合作关系，拥有较好的企业信誉和品牌形象。 主营产品:血清、抗体、抗原、核酸提取、核酸纯化等生化试剂

使用方法：

1、裂解液的准备：

根据所需提取的样本量，每500μL裂解液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。

2、在4℃,10000g条件下将菌液离心5min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。

3、用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。

4、按每50-100mg湿重菌体样本加入500μL裂解液，吹打混匀，置摇床室温振荡30-45分钟。

【注】：

● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

● 如果没有低温振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

5、在4℃ 10000×g条件下将菌液离心5分钟，将上清移入干净离心管。

6、即得到细菌蛋白样品。

7、将细菌总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA方法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。

● 蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

常见问题分析：

● 蛋白浓度低？

膜蛋白丰度比较低，处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

● 用什么方法定量蛋白？

建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性吗？

本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

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