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所在地:北京
型号:HR9103-50T
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更新时间:2023-05-31
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公司地址:北京市海淀区紫雀路33号院3号楼
真菌线粒体提取试剂盒(小型真菌)试剂盒以外自备试剂和仪器:
● 离心机 ● 振荡器 ● Dounce匀浆器/匀浆机 ● 涡旋混匀器 ● PBS缓冲液(pH7.4)或HBSS
真菌线粒体提取试剂盒(小型真菌)注意事项:
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
真菌线粒体提取试剂盒(小型真菌)使用方法:
1、取500mg-1g真菌样本,用PBS洗一次。离心收集菌体沉淀。
2、在菌体中加入1-2ml提取液A后用匀浆机/Dounce匀浆器充分匀浆。
【注】:
● 或者将菌体置于研钵中用液氮研磨,研磨后加入2ml冷的提取液A。
● 或者在菌体中直接加入2ml提取液A 直接置冰上研磨。
3、将匀浆液在500×g离心5分钟,弃沉淀,收集上清。
4、将上清液在1000×g离心5分钟,弃沉淀,收集上清。
5、将上清液在2000×g离心5分钟,弃沉淀,收集上清。
6、将上清在11000×g离心20分钟,弃上清,留沉淀。
7、在沉淀中加入400μL线粒体提取液B,充分混匀。
8、在4℃,11000×g条件下离心15分钟。
9、弃上清,沉淀用100-200μL线粒体保存液C重悬。
【注】:
● 也可不用试剂盒中的线粒体保存液重悬。
● 根据实验需要选择合适的缓冲液重悬线粒体或直接用于下游实验。
10、即得到线粒体样品,置冰箱备用或直接用于下游实验。
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