HR8809-200T 冰冻切片过氧化氢(H2O2)检测试剂盒

O32过氧化氢荧光探针具有极高的H2O2反应特异性，与其它类型的活性氧反应较少。在激发波长488nm，发射波长526nm附近，用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等检测绿色荧光，从而测定细胞内过氧化氢水平。

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试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

● 荧光显微镜，激发波长488 nm，发射波长520 ± 10 nm，或者按照FITC荧光检测条件检测

● 离心机 ● 移液器 ● PBS缓冲液 ● 或者HBSS（无酚红）

使用注意事项：

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

● 对于某些样本，如果荧光太强，可以按照1:200-1:1000稀释探针。探针标记的时间也可以根据情况在20-60分钟内适当进行调整。

● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

● 过氧化氢O32探针在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。

● O32染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。

● O32对湿度非常敏感，若是O32溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。不可使用含水的吸头。

● 对不同的组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察过氧化氢的变化，很多细胞内的过氧化氢绝对水平较低，需要根据实际情况适当延长孵育时间。

● 过氧化氢O32探针可以根据需要的用量分装后冻存，避免反复冻融。

● 过氧化氢O32探针不可以一次性全部稀释后长期保存不用，稀释后稳定性变差，有效期缩短。

● 以下操作步骤仅供参考，请根据实际样本情况调整。

使用方法：

试剂配制：

1、根据样本数，用纯水将O32过氧化氢荧光探针200倍稀释，配成染色工作液。

2、用纯水将10×清洗液10倍稀释，配成1×清洗液工作液。

探针标记：

1、准备待测的厚为10μm 的未经固定处理的冰冻切片。

【注】：

● 建议使用新鲜组织（手术切除后1小时内）制成的冰冻切片。

● 不新鲜的样本可能检测不到过氧化氢。

2、室温下，小心加上200μL清洗液工作液，铺满整个切片表面，静置5-10分钟。

3、小心吸除清洗液。

4、滴加100μL染色工作液，在37℃培养箱避光孵育20-60分钟。

【注】：

● 最好在湿盒中孵育，避免液体蒸发。

5、移除染色液。

6、用PBS洗涤切片2-3次。

7、加盖玻片或甘油封片。

8、荧光显微镜检测。

【注】：

● 染色完成后，立即进行荧光定性分析。

● 激发波长488nm，发射波长525nm。

● 荧光强，表明过氧化氢（H2O2）含量高。

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