HR8227-50T Ca2+钙离子检测试剂盒

F04荧光探针采用可见光激发,与传统紫外光激发荧光探针相比,仪器适用范围更广泛,具有更强探针吸收性能,使得更低浓度探针即可成功检测Ca2+变化,从而降低了对活细胞光毒性,检测敏感度更高。

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检测方法：

● 流式细胞仪 ● 荧光显微镜 ● 激光共聚焦

样本类型：

● 悬浮细胞 ● 贴壁细胞

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

● 激光共聚焦/荧光显微镜/流式细胞仪/荧光酶标仪/光度计等 ● 离心机 ● 移液器 ● PBS或HBSS

使用注意事项：

● 螺旋盖微量试剂管装试剂开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。

● 钙离子染色液为DMSO 溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

● 探针为了便于观察防止误操作导致损失,在试剂盒中时是采用透明管包装,收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。

● 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

● 染色后立即进行分析。

● F04探针易受潮,稳定性较差,注意干燥保存。从冰箱取出后,请确认在干燥环境放至室温后再开封。

● F04 探针母液时要用干燥的新吸头,不能使用含水的吸头。

● 未使用完的F04 探针母液请拧紧螺旋盖,避免受潮失效。母液遇水极易分解,如果长期不用,建议根据每次使用量分装保存,用封口膜封口,并用铝箔纸包裹,放在一个密闭性能好的塑料袋中,并放入一包干燥剂,在≤-20℃密封避光保存。

● F04探针工作液含水,配制后不可以长期保存,须现配现用。

● F04融解后离心至管底部再打开螺旋盖,防止开盖时损失。

● 可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液（可选步骤）,Pluronic F127可以帮助F04更快进入细胞,不建议在Pluronic F127中长期保存F04溶液。

● 标记条件因细胞的种类而异,据不同样本实际染色结果做相应调整,每次正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等,找到最佳实验条件。以下方法仅供参考。

使用方法：

1、染色工作液的配制：

用 HBSS稀释F04溶液500倍-1000倍,配制成F04染色工作液。

【注】：

● 推荐该探针加载终浓度在500-1000倍稀释,具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。500-1000倍稀释适合大部分细胞样本，有些细胞可能需要使用200倍稀释。

● 为了避免过度加载造成细胞毒性,建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

● 工作液需现配现用,避免反复冻存。

● 不能用含血清的培养基稀释探针，可以用相应的无血清培养基稀释探针。

2、收集培养好的待测细胞样本,用HBSS洗涤细胞3次。

【注】：

● 没有HBSS也可以用PBS洗细胞。

● 培养基血清中的酯酶会降解F04,从而降低F04进入细胞的效果。所以加工作液之前必须洗涤细胞,尽量去除培养基残留。

● 可以收集细胞后染色，也可以原位染色。

3、离心去上清后,将F04染色工作液加入细胞,在37℃孵育20-60分钟。

【注】：

● 关于孵育的时间,首次预实验不能确定,建议先孵育30分钟。

● 根据荧光效果：如果太强,适当缩短时间；如果荧光强度太弱,适当延长时间。

● 染色工作液加入量以覆盖细胞即可。

● 如果F04探针进入细胞的效果不好，可以向F04染色溶液中加入适量20% Pluronic F127溶液，最终稀释至其浓度为0.04-0.05%，Pluronic F127可以防止F04在HBSS中聚合并能帮助其进入细胞。

● Pluronic F127可降低F04探针的稳定性，因此只能在配制工作液时加入，不能将其加入储存液长期保存。

4、用HBSS洗涤细胞2-3次。

5、用HBSS重悬细胞。在37℃下再继续孵育20-40分钟。

6、然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长488-495nm,发射波长516nm。

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