HR8573-1000T 细胞膜染色试剂盒(深红色)

荧光探针M04通常不会明显影响细胞的活力，因此被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂（long-term tracer）。除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP（Fluorescence Recovery After Photobleaching）检测脂在细胞膜上

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使用注意事项：

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

● M04染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。

注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

● 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。

● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

● 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。

● 染色后立即进行分析。

● 本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。

使用方法：

1、染色工作液的配制：

根据样本数量，用37℃培养箱预热染料稀释液试剂B将M04 荧光染料10倍稀释。再用HBSS或相应的无血清培养基或其他缓冲液将探针M04进行40-200倍稀释，配制成染色工作液。

【注】：

● 也可以不使用本试剂盒中的试剂B，直接用HBSS等缓冲液或相应的无血清培养基稀释M04染料至所需浓度。

● 开始实验前，使用HBSS缓冲液或无血清培养基稀释染料储存液到需要的工作浓度。工作浓度应根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，建议至少在超过10倍范围的浓度下进行测试。一般染色终浓度为试剂盒中染料母液的400-2000倍稀释，1000-2000倍适合大多数细胞样本。

● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。

● 工作液现配现用。

● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。

● 若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，荧光信号会衰减。

2、细胞染色

悬浮细胞染色

1) 用PBS洗涤细胞2次。

【注】：

● 500×g离心5分钟。

2) 加入适量体积的染色工作液重悬细胞，使其密度大约为1×10⁶/mL。

3) 在37℃孵育细胞5～120分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

【注】：

● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

4) 孵育结束，500×g离心5分钟。

5) 倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的培养基重悬细胞。

6) 重复（4），（5）步骤两次以上。

贴壁细胞染色

1) 用PBS洗涤细胞2 次。

2) 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。

【注】：

● 96孔细胞培养板每孔加入100μL染色液即可。

3) 37℃孵育细胞5～120分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

【注】：

● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

4) 吸干染色工作液，用培养液洗培养板或盖玻片2～3次，每次用预热的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10分钟，然后吸干培养基。

3、用荧光显微镜或流式细胞仪检测

激发波长为748nm，最大发射波长为780nm。

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