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所在地:北京
型号:HR8260-500T
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更新时间:2023-05-31
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公司地址:北京市海淀区紫雀路33号院3号楼
产品特点:
● 方便:可用酶标仪检测;
● 快速:最快1小时内即可完成实验;
● 灵敏:数据可靠,重现性好,线性范围更宽;
● 准确:试剂本身稳定性高,实验结果稳定可靠。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材:
● 酶标仪 ● 离心机 ● 移液器 ● Matrigel/Fibronectin,Fn ● PBS或者HBSS
使用注意事项:
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小,重悬细胞是动作要轻柔,避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
● 染色培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。一般情况下,白细胞较难染色,因此需要较长的培养时间。培养时间一般为1-4小时,但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察染色程度 (根据细胞种类而定,需要摸索一下条件)。当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔(100μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2500个/孔(100μL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入染色液B。
● 有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加染色液B试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基液面下加,容易产生气泡,会干扰O.D值读数。
● OD值在0.4-2.0之间均可,最大值控制在1.0左右为宜,小于0.4或大于2.0请调整接种量和培养时间。
使用方法:
包被:
1、根据细胞类型,96孔板每孔加入100μL Matrigel或Fibronectin包被液。
2、将培养板置2-8℃过夜。
3、移除包被液。
4、用洗涤液洗涤1-3次。
细胞接种:
1、待测定细胞处理好后,用胰酶消化,PBS洗涤,然后用相应培养基重悬,制成细胞悬液。
2、按5×104细胞/孔接种96孔板,建议设3-5个复孔。同时设立对照组,即孵育后不弃上清组。
3、放37℃培养箱孵育30分钟-1小时。
4、取出培养板,吸弃培养基。
【注】:
● 对照孔培养基不要吸除。
5、然后用相应的培养基洗涤2-3次。
6、每孔加入100μL新鲜培养基。
粘附率检测:
1、96孔板每孔加入10μL细胞染色液B。
2、37℃孵育30分钟-4小时。
【注】:
● 不同细胞需要孵育的时间差异较大,需要摸索最佳孵育时间,一般孵育30分钟后拿出培养板检测对照细胞孔的450nm 的OD值,达到0.8-1.0即可。
3、测定样品孔OD值。测定450 nm 各孔的吸光值,如无450nm滤光片,可以使用450-490nm的滤光片。
4、细胞粘附率计算。
将各测试孔的OD值减去空白孔(未加细胞孔)OD值。各重复孔的OD值取平均数。
细胞粘附率% =((待测细胞OD-空白OD)/(对照细胞OD-空白OD))×100
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