HR9101-50T 植物细胞核提取试剂盒-酶法

本试剂盒采用酶法提取，酶法提取制备的植物核，回收率提高，纯度高，保持天然活性，但是耗时较长。非酶法的提取试剂盒提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，而且绝少交叉污染，但是回收率相比酶法较低。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒

北京百奥莱博科技有限公司是一家专业的生物试剂销售公司。公司主要经营血清、抗原、抗体等生物试剂产品，可以为您提供专业的技术服务，以优良的价格、优质的服务、优先的理念，满足客户的各方面的需求，与国内多家企业、单位建立了良好的长期合作关系，拥有较好的企业信誉和品牌形象。 主营产品:血清、抗体、抗原、核酸提取、核酸纯化等生化试剂

产品特点：

● 使用方便。

● 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

● 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

● 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立的蛋白酶抑制剂Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

● 离心机 ● 振荡器 ● 匀浆机/Dounce匀浆器 ● 涡旋混匀器 ● PBS ● 100μm细胞筛

使用注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

● 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂。

使用方法：

1、取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200-400mg植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入1-2mL PBS后用匀浆机充分匀浆或者加适量PBS后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。

2、将匀浆液用100μm细胞筛过滤；

【注】：

● 没有细胞筛的话，在4℃，稍微静置，让粗纤维，成团组织块等沉降，或者以低于100×g力条件下离心1分钟，收集细胞上清，弃组织沉淀。

● 有些含黏液较多的样品可能难以吸取，可以将1mL吸头尖稍微剪掉一点使用。

3、将滤液在2000×g条件下离心5-10分钟，收集沉淀。

4、在沉淀中加入500μL提取液A，充分混匀。

【注】：

● 培养细胞1000×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞后用PBS洗涤2次，然后直接加入提取液A重悬。

● 大约每300μL细胞压积中加入1mL提取液A。

● 一般加入样本体积的2-3倍体积的提取液A，充分淹没样本即可。

5、将细胞悬液置振荡器上37℃或室温振荡12-72小时。

【注】：

● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

● 没有振荡条件也可以不振荡，中间每隔几小时用移液器吹打混匀即可。

● 不同类型的植物样本需要处理的时间差异较大。拟南芥较易处理，鲜嫩叶片较易处理，年龄小的样本处理时间短。拟南芥嫩叶最短4小时即可。

● 部分细胞壁较厚的植物类型可能需要处理更长时间。可以延长至72 小时以上处理以提高核得率。

6、在2000×g条件下离心10分钟，弃上清，收集沉淀。

7、在沉淀中加入500μL-1mL提取液B，用匀浆器充分匀浆，在匀浆液中补充提取液B至1mL，充分混匀。

8、置振荡器振荡5-10分钟。

【注】：

● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

● 没有振荡条件也可以不振荡，置4℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

9、在2000×g条件下离心10分钟，弃上清，收集沉淀，即为细胞核。

10、用用细胞核保存液C或者其它相应的缓冲液重悬细胞核，置冰箱备用或直接用于下游实验。

【注】：

● 可以不用试剂C。

● 根据下游实验需要选择重悬液。

● 保存液中的细胞核可以2000×g条件下离心10分钟重新回收。

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