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所在地：北京
型号：HR0612-50T
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更新时间：2023-05-31
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公司地址：北京市海淀区紫雀路33号院3号楼
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王欣(女士) （来电时请说是从给览网看到我的)
检测方法：
● 流式细胞仪 ● 荧光显微镜 ● 激光共聚焦
样本类型：
● 悬浮细胞 ● 贴壁细胞
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
● 荧光显微镜/激光共聚焦/流式细胞仪 ● 离心机 ● 移液器 ● PBS ● HBSS
使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装试剂开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
● F03染色液为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 用前,将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
● 染色后立即进行分析。
● 本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。
● F03探针在水中的稳定性比较差,染色工作液必须现配现用,并且在当天用完。
● F03探针对湿度比较敏感,每次取完需要量后,必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量,分装密闭保存。不可使用含水的吸头。
● 试剂A母液请拧紧螺旋盖,避免受潮失效。
● 可在染色溶液中加入等体积的20% Pluro
● 标记条件因细胞的种类而异,据不同样本实际染色结果做相应调整,每次正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等,找到最佳实验条件。以下方法仅供参考。
使用方法：
1、染色工作液的配制：
根据样本数量,用37℃培养箱预热的HBSS将F03荧光染料200-1000倍稀释,配制成染色工作液。
【注】：
● 也可以用相应的无血清培养基稀释F03染料至所需浓度。
● 开始实验前,使用HBSS缓冲液或无血清培养基稀释染料储存液到需要的工作浓度。工作浓度应根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度,建议至少在超过10倍范围的浓度下进行测试。一般染色终浓度500-1000倍稀释,500-1000倍适合大多数细胞样本。
● 建议收到产品后,根据单次使用量,对母液进行小量分装,每次使用一管,试剂-20℃避光保存,一年稳定。
● 工作液需现配现用,避免反复冻存。
● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性,建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
● 若细胞在染色后不含染料的培养基中孵育,荧光信号会衰减。
2、细胞染色
悬浮细胞染色
（1）用PBS洗涤细胞2次。
【注】：
● 500×g离心5分钟。根据实验室平时离心细胞的离心力离心。
（2）加入适量体积的染色工作液重悬细胞,使其密度大约为1×106/mL。
（3）在37℃孵育细胞20分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
【注】：
● 若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。
（4）加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS,再继续孵育40分钟。
（5）孵育结束,500×g离心5分钟。
【注】：
● 以下步骤均为洗涤细胞。根据实验室平时离心细胞的离心力和时间进行离心。
（6）弃上清液,再次缓慢加入37℃预热的HBSS重悬细胞。
（7）重复（5）,（6）步骤两次。
（8）加入HBSS重悬细胞,在37℃下再继续孵育20分钟。
（9）然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
贴壁细胞染色
（1）用PBS洗涤细胞2次。
（2）细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
【注】：
● 96孔细胞培养板每孔加入100μL染色液即可。
（3）37℃孵育细胞20-60分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
【注】：
● 若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。
（4）吸干染色工作液,用HBSS洗培养板或盖玻片2-3次,每次用预热的HBSS覆盖所有细胞,然后吸干培养基。
（5）加入HBSS,在37℃下再继续孵育20分钟。
（6）然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
3、用荧光显微镜或流式细胞仪检测。
激发波长为488nm,最大发射波长为525nm。
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