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所在地:北京
型号:HR0035-50T
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更新时间:2023-05-31
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公司地址:北京市海淀区紫雀路33号院3号楼
产品特点:
1、使用方便,不需经过反复冻融、超声破碎等前处理。
2、含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
3、紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
4、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备试剂和仪器:
● 移液器 ● 离心机 ● 振荡器 ● 涡旋混匀器 ● 匀浆机/匀浆器 ● PBS ● 蛋白定量试剂盒
注意事项:
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
● 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法:
植物组织组蛋白提取:
1、提取液制备:
每500μL 蛋白提取液A 中加入2μL 蛋白酶抑制剂混合物混匀后置冰上备用。
【注】:
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2、取100mg植物组织样本用剪刀尽可能剪碎,加入蛋白提取液A,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3、将组织匀浆吸入一预冷干净离心管中,静置10分钟,在4℃,16000×g条件离心15分钟,弃上清。
4、沉淀中加入100μL组蛋白提取液B。
5、用200μL枪头反复吹打混匀或充分涡旋振荡混匀,置4℃冰箱过夜存放。
6、16000×g条件下离心10分钟,收集上清。
7、在上清中加入10-20μL试剂C充分混匀。
8、加入上样缓冲液混匀后煮沸,分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】:
● 加入上样缓冲液后应为上样缓冲液的蓝色,如果颜色变黄,可以再加入试剂C混匀,每次加入5μL,至恢复蓝色为止。
植物细胞组蛋白提取:
1、提取液制备:
每500μL蛋白提取液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物混匀后置冰上备用。
2、收集5-10×106个细胞,在4℃,1000×g条件下离心5-10分钟,吸干上清,收集细胞。
3、用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4、每5-10×106个细胞中加入500μL蛋白提取液A,混匀后,在4℃条件下轻轻振荡15分钟。
5、在4℃,16000×g条件下离心15分钟,弃上清。
6、沉淀中加入100μL组蛋白提取液B。
7、用200μL枪头反复吹打混匀或充分涡旋振荡混匀。
8、置4℃冰箱过夜存放。
9、16000×g条件下离心10分钟,收集上清。
10、在上清中加入10-20μL试剂C充分混匀。
11、加入上样缓冲液混匀后煮沸,分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】:
● 加入上样缓冲液后应为上样缓冲液的蓝色,如果颜色变黄,可以再加入试剂C混匀,每次加入5μL,至恢复蓝色为止。
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