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所在地:北京
型号:HR0359-50mL
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电话:18518407031
更新时间:2023-05-31
浏览次数:747
公司地址:北京市海淀区紫雀路33号院3号楼
适用样本:
● 细胞 ● 组织
产品特点:
● 使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
● 提取过程简单方便,将蛋白提取的时间缩短至30 分钟-1 小时。
● 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
● 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
● 总蛋白提取液含多种有效成分,可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。
● 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6 种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材:
● 离心机 ● 振荡器 ● 涡旋混匀器 ● PBS
使用方法:
细胞蛋白提取
1、蛋白提取液制备:
每1ml冷的蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2、取5-10×106个细胞,在4℃,1000g条件下离心5-10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
3、用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4、每5×106个细胞中加入500μL冷的蛋白提取液,混匀后,在4℃条件下振荡15-20分钟。
【注】:
● 每106个细胞,大约10mg或10μL压积,加100μL蛋白提取液。大约相当于6孔板的每孔加入100μL~150μL,或一个75cm2培养瓶加1ml。提取液和细胞应充分接触。如果蛋白提取液不足量,细胞裂解效率将会降低。
5、在4℃,12000-14000g条件下离心15分钟。
6、快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,用于下游实验。
组织蛋白提取
1、蛋白提取液制备:
每1ml冷的蛋白提取液加入2μL蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2、取100mg组织样本剪碎,加入1ml蛋白提取液,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3、将组织匀浆在4℃振荡15-25分钟。
4、在4℃,12000g条件下离心10分钟。
5、将上清吸入另一预冷的干净离心管,用于下游实验。
上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
【注】:
● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品:HR0329。
● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
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