HR0456-100T Propidium Iodide染色试剂盒

PI检测试剂盒可用于细胞凋亡检测，也可用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA 染色，染色后可用荧光显微镜检测或流式细胞仪检测。

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试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦 ● 离心机 ● 移液器 ● PBS或HBSS

注意事项：

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

● 染色后立即进行分析。

● 染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。

● 流式检测细胞凋亡时，其DNA可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一，但这种DNA可染性降低也可能是因为DNA含量的降低，或者是因为DNA结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。

● 本染色液可用于石蜡切片、冰冻切片、细胞涂片、细胞的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。

使用方法：

本染色试剂盒用于细胞染色分析，也可用于细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例，细胞染色可用预冷的70%的乙醇固定，4℃，1-2小时，也可不固定，其他方法请参阅相关资料。

染色缓冲液的配制：

根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。 取100μL试剂B加900μL无菌纯水稀释，混匀即成染色缓冲液。

荧光显微镜观察：

1、收集细胞，PBS洗涤细胞一次，1000×g离心5分钟，用染色缓冲液重悬细胞，调整细胞浓度约为10⁶个/ml；

2、取100μL细胞悬液，加入2-5μL PI染液，轻轻混匀；

3、4℃避光放置5 min后，滴加于载玻片上，加盖玻片；

4、荧光显微镜检测。

流式检测：

1、收集细胞，PBS洗涤细胞一次，1000×g离心5分钟，用染色缓冲液重悬细胞，调整细胞浓度约为10⁶个/ml；

2、500μL细胞悬液中加入5-10μL PI染液；

3、在4℃避光放置15-30min；

4、流式细胞仪检测。

结果分析 ：

置于荧光显微镜下用488nm激发光观察结果：正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。

流式检测用氩离子激发荧光，激光光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光分析PI 荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。在前散射光对侧散射光的散点图或地形图上，凋亡细胞与正常细胞相比，前散射光降低，而侧散射光可高可低，与细胞的类型有关；

在分析PI荧光的直方图时，先用门技术排除成双或聚集的细胞以及发微弱荧光的细胞碎片，在PI荧光的直方图上，凋亡细胞在G1/G0期前出现一亚二倍体峰。如以G1/G0期所在位置的荧光强度为1.0，则一个典型的凋亡细胞样本其亚二倍体峰的荧光强度为0.45，可用鸡和鲑鱼的红细胞的PI荧光强度做参照标准，两者分别为0.35和0.7，可以确保在两者之间的不是细胞碎片而是完整的细胞。

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