HR8788-100T 单线态氧检测试剂盒-液体样本

在激发波长488 nm，发射波长526 nm 附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测绿色荧光，从而测定细胞内单线态氧水平。

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产品特点：

● 使用方便：可用荧光分光光度计、荧光酶标仪快速检测；

● 背景低，灵敏度高；

● 线性范围宽，使用方便。

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 荧光分光光度计/酶标仪，激发波长500±15nm，发射波长520±20nm，或按照FITC荧光检测条件检测。 ● 移液器 ● 离心机 ● PBS ● HBSS(无酚红)

注意事项：

● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

● 单线态氧探针O21在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。

● 如果用于细胞检测，对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察单线态氧的变化，很多细胞内的单线态氧绝对水平较低，需要根据实际情况适当延长孵育时间。

● 单线态氧O21不可以一次性全部稀释后长期保存不用，稀释后稳定性变差，有效期缩短。

使用方法：

液体样品单线态氧检测：

1、取100μL待测液体样品，将0.5μL O21探针加入待检测液体样品，充分混匀。

【注】：

● 终浓度为母液的100-1000倍稀释使用，可以根据预实验情况调整探针用量。

● 200-500倍稀释适合大多数样品。

● 微量液体不好添加时，可以根据待测样品数量，将探针母液用水适当稀释增加体积后，再加入待测液体样品。

2、用荧光光度计或荧光酶标仪检测样品荧光情况。

绿色荧光强度与单线态氧水平成正比。

细胞样品检测：

单线态氧O21探针配制：

根据需要的用量，用无血清培养基200倍稀释单线态氧O21探针后充分混匀，避光保存备用。

【注】：

● 终浓度为母液的100-1000倍稀释使用，可以根据预实验情况调整探针用量。

● 200-500倍稀释适合大多数样品。

细胞破膜：

1、用破膜剂处理细胞。

2、用PBS洗涤细胞2-3次。

单线态氧O21探针标记：

3、单线态氧O21溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲盐溶液中稀释到所需浓度，100-200倍稀释，以此染色液更换细胞培养液；也可直接向无血清细胞孵育液体中加入单线态氧O21探针溶液至所需浓度。

4、依据细胞单线态氧含量的不同，单线态氧O21终浓度可选择在100-1000倍稀释的范围，孵育时间可选择1-2小时，在37℃或室温进行避光孵育。

5、孵育结束后，用PBS等新鲜溶液清洗细胞或组织。漂洗时间要短。

荧光检测：

1、对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取25-50μL细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。

2、用荧光光度计或荧光酶标仪或流式检测样品荧光情况。或者荧光显微镜/激光共聚焦下观察。

流式细胞仪分析：

1、对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5～1 mL冰冷PBS重悬细胞（5～10万）。

2、采用488nm波长激发，测定待测细胞平均荧光强度。使用488nm 激发波长，525nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。探针O21的荧光光谱和FITC非常相似，可以用FITC的参数设置检测探针产物。

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