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所在地：北京
型号：HR8258-100T
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更新时间：2023-05-31
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公司地址：北京市海淀区紫雀路33号院3号楼
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王欣(女士) （来电时请说是从给览网看到我的)
产品特点：
● 方便：可用荧光显微镜、激光共聚焦、荧光酶标仪检测；
● 快速：最快1小时内即可完成实验；
● 灵敏：数据可靠，重现性好，线性范围更宽；
● 准确：试剂本身稳定性高，实验结果稳定可靠。
检测方法：
● 荧光显微镜 ● 荧光酶标仪 ● 激光共聚焦
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
● 荧光酶标仪 ● 离心机 ● 移液器 ● PBS或者HBSS（无酚红）
● 荧光检测专用的透明底黑色96孔板
使用注意事项：
● 预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小，重悬细胞是动作要轻柔，避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
● 染色培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入染色液B。
● 有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加染色液B试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰F值读数。
● 染色液B为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否则容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 由于试剂B的工作液稳定性比较差，染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。
● 试剂B对湿度非常敏感，试剂B溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密闭保存。不可使用含水的吸头。
● 试剂B母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
使用方法：
包被：
1、96孔板每孔加入100μL包被液。
2、将培养板置2-8℃过夜。
3、移除包被液。
4、干燥培养器皿。通风橱内吹风数分钟即可完成干燥，至肉眼观察完全干燥。
5、用洗涤液洗涤1-3次。
细胞接种：
1、待测定细胞处理好后，用胰酶消化，PBS洗涤，然后用相应培养基重悬，制成细胞悬液。
2、按5×104细胞/孔接种96孔板，建议设3-5个复孔。同时设立对照组，即孵育后不弃上清组。
3、放37℃培养箱孵育30分钟-1小时。
4、取出培养板，吸弃培养基。
【注】：
●对照孔培养基不要吸除。
5、然后用相应的培养基洗涤2-3次。
【注】：
● 由于培养基中的血清等可能含有酯酶，导致C01细胞活性探针分解，会导致空白上升，所以需要用PBS洗涤数次直到完全洗净。
6、每孔加入100μL新鲜无血清培养基。
粘附率检测：
1、染色工作液的配制：
从冰箱中取出荧光染色试剂，室温溶解后混匀。
根据样品数按下列比例配制染色工作液。
用37℃培养箱预热缓冲液(如HBSS)或无血清培养基将 C01荧光染料10-50倍稀释，配制成染色工作液。
【注】：
● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。
● 工作液现配现用。
● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
● 若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，荧光信号会衰减。
2、96孔板每孔加入10μL细胞染色液B工作液，37℃避光孵育15-30分钟。
3、加入100μL HBSS或无血清培养基。
4、用荧光酶标仪/激光共聚焦检测结果。最大激发波长488nm，最大发射波长分别为520nm。
5、细胞粘附率计算。
将各测试孔的荧光强度值减去空白孔(未加细胞孔)荧光强度值。各重复孔的荧光强度值取平均数。
细胞粘附率% =((F待测细胞-F空白)/(F对照细胞-F空白))×100
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