肉桂酸-4-羟化酶(C4H)活性检测试剂盒 紫外分光光度法

肉桂酸-4-羟化酶(C4H)活性检测试剂盒 紫外分光光度法

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中文名称：肉桂酸-4-羟化酶(C4H)活性检测试剂盒 紫外分光光度法
测定方法： 紫外分光光度法
测定规格： 50管/48样 100管/96样
保存条件：低温避光保存
有 效 期：６个月
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定    
肉桂酸-4-羟化酶(C4H)活性检测试剂盒 紫外分光光度法测定意义：
C4H又称反式肉桂酸-4-单氧化酶，多存在于高等植物、酵母、菌类中，该酶催化肉桂酸羟化作用产生4-香豆酸盐，是苯丙烷途径中继L-苯丙氨酸解氨酶之后的第二个关键酶。

肉桂酸-4-羟化酶(C4H)活性检测试剂盒 紫外分光光度法测定原理：
C4H催化肉桂酸和NADP生成4-香豆酸盐和NADPH，在340nm下测定NADPH生成速率，即可反映C4H活性。

需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：
细菌或培养细胞：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：
按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）取试剂二一瓶，加入25ml试剂一充分溶解混匀，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；现配现用（配好后24h内用完）；
（2）在1ml石英比色皿中加入50μl样本和950μl试剂二，混匀，立即记录340nm处初始吸光值A1和 5min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。

C4H活性计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
C4H（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
C4H（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
C4H（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=1.286×ΔA
V反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.05 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失,请仔细阅读购买说明!
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