胃蛋白酶测试盒 微量法

胃蛋白酶测试盒 微量法

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中文名称：胃蛋白酶测试盒 微量法
测定方法：微量法
测定规格：100管/48样
保存条件：低温避光保存
有 效 期：６个月
本产品仅用于科研实验使用！
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

胃蛋白酶测试盒 微量法测定意义：
胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。

胃蛋白酶测试盒 微量法测定原理：
胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，水解产物与福林试剂反应后显蓝色；一定范围内，其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。

自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：
试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 10mL 试剂二充分溶解。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 10mL 蒸馏水充分溶解。
试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 15mL 蒸馏水充分溶解。
试剂六：液体 3.3mL×1 瓶，4℃保存。
标准品：液体 1.27mL×1 支，0.5μmol/mL 酪氨酸标准溶液浓度 4℃保存。

粗酶液提取：
组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即粗酶液。

测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 580 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三和试剂四置于 37℃水浴预热 30min。
3. 标准管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 20μL 标准品，40μL 试剂二，120μL 试剂五，20μL 试剂六，混匀后室温静置 20min，于 580 nm 测光吸收，记为 A 标准管。
4. 空白管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 20μL 蒸馏水，40μL 试剂二，120μL 试剂五，20μL 试剂六，混匀后室温静置 20min，于 580 nm 测光吸收，记为 A 标准空白管。
5. 对照管：取 EP 管，加入 100 μL 蒸馏水，置于 37℃水浴保温 10min；加入 100μL 试剂四，盖紧后摇匀 1min；加入 20μL 粗酶液，混匀后 8000g 4℃离心 10 分钟取上清；在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20μL，再加入 40μL 试剂二，120μL 试剂五，20μL 试剂六，混匀后室温静置 20min，于 580 nm 测光吸收，记为 A 空白管。
6. 测定管：取 EP 管，加入 20μL 粗酶液，100μL 试剂三，置于 37℃水浴保温 10min；加入100μL 试剂四，盖紧后摇匀 1min；8000g 4℃离心 10 分钟取上清；在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20μL，再加入 40μL 试剂二，120μL 试剂五，20μL 试剂六，混匀后室温静置20min，于 580 nm 测光吸收，记为 A 测定管。
注意：空白管和标准管只需要测定一次。


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