羟脯氨酸检测试剂盒 分光光度法

羟脯氨酸检测试剂盒 分光光度法

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中文名称：羟脯氨酸检测试剂盒 分光光度法
测定方法：可见分光光度法
测定规格：50管/48样
保存条件：低温避光保存
有 效 期：６个月
本产品仅用于科研实验使用！
羟脯氨酸检测试剂盒 分光光度法测定意义：HYP 是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP 含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

羟脯氨酸检测试剂盒 分光光度法测定原理：样品经水解产生游离的HYP，进一补被氯胺T氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物，在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值，可计算HYP含量。

自备实验用品及仪器
天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、6mol/L 盐酸
和蒸馏水。

试剂组成和配制
组织提取液：6mol/L 盐酸，自备。浓盐酸：H 2 O（V/V）= 1:1，室温保存。
细胞提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

羟脯氨酸提取
1. 组织：称取约 0.5g 样品于玻璃管，加入 5mL 的组织提取液，置于 110℃烘箱，水解 6
12 小时，12000g，25℃，离心 20min，用提取液定容 5mL，取上清待测。
2. 细胞：取 500 万个细胞，加入 2mL 的细胞提取液，于高压消毒器中 15 磅保持 30min，
自然降压后待测。
3. 血清等液体：直接测定。

羟脯氨酸含量计算公式
标准曲线：y=64.875x+ 0.0251，R 2 =0.9991
（1）按组织计算
HYP 含量（mg/g）=（A 560 -0.0251）÷ 64.875×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
= 0.385×（A 560 -0.0251）÷W
（2）按细胞计算
HYP 含量（mg/10 4 cell）=（A 560 -0.0251）÷ 64.875×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量(万个)= 0.154×（A 560 -0.0251）÷细胞数量（万个）
（3）按液体体积计算
HYP 含量（mg/mL）=（A 560 -0.0251）÷ 64.875×V 反总÷V 样
= 0.077×（A 560 -0.0251）
V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应中样品体积，0.2mL；V 样总：加入提取液体积， mL；
W：样品质量，g

注意事项
1、 OD 值大于 0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、 试剂有一定的毒性，请操作时做好防护措施，防止吸入或与皮肤接触。
3、 低检出限为 3.8mg/L。
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