中文名称：
乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒(微量法)
测定方法：微量法
测定规格：50管/48样
保存条件：低温避光保存
有 效 期：６个月
本产品仅用于科研实验使用！
乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒(微量法)产品简介：
LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与
乳酸之间的可逆反应，伴随着 NAD+/NADH 之间互变。
LDH 催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒(微量法)产品内容：
提取液：60mL×1瓶， 4℃保存；
试剂一：液体7 mL×1瓶， 4℃保存；
试剂二：粉剂×1支，-20℃保存，用时加入1.3 mL双蒸水充分溶解备用，配好后-20 ℃保存，可保存两周，禁 止反复冻融；
试剂三：液体7 mL×1瓶，4℃保存；
试剂四：液体25mL×1瓶，4℃保存；
丙酮酸钠标准液：液体1mL×1支，4℃保存，2mol/ml。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
3、丙酮酸钠标准液：取100L标准液，倍比稀释至1、0.5、0.25、0.125、0mol/mL，用2、1、0.5、0.25、0.125、0mol/mL 做标准曲线。
二、测定操作：
1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
三、LDH 活力单位计算：
1、计算样品丙酮酸的含量，即将A带入回归方程中（x），计算y值
2、血清（浆）LDH活力的计算
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/mL）=y×V样÷V样÷T×103=66.7×y
3、细胞、细菌和组织中LDH活力的计算
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/mg prot）= y×V样÷（Cpr×V样）÷T×103=66.7×y÷Cpr
需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/g鲜重）= y×V样÷（W÷V样总×V样）÷T×103=66.67×y÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/104 cell）= y×V样÷（500÷V样总×V样）÷T×103=0.133×y
V样：反应体系中加入的样本体积，10L=0.01mL；V样总：加入的提取液体积，1mL；T：反应时间，15 min；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；103：1mol/mL=103nmol/mL。
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