中文名称：
丙酮酸脱氢酶(PDH)测试盒 微量法
测定方法：微量法
测定规格：100管/96样
保存条件：低温避光保存
有 效 期：６个月
产品内容：
试剂一：110mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：1mL×1支，-20℃避光保存；
试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存；
试剂四：粉剂×1支，4℃保存；
试剂五：粉剂×1支，-20℃保存；
试剂六：粉剂×1支，4℃保存；临用前加入1mL蒸馏水；
试剂七：粉剂×1支，4℃保存；
工作液的配制：临用前把试剂四、五、0.5mL六、七转移到试剂三中混合溶解待用。
丙酮酸脱氢酶(PDH)测试盒 微量法产品说明：
PDH（EC 4.1.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶，催化丙酮酸脱梭生成羟乙基-TPP，把糖酵解和三羧酸循环连接起来。
PDH催化丙酮酸脱氢，同时还原2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），从而导致605nm光吸收的减少。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
丙酮酸脱氢酶(PDH)测试盒 微量法操作步骤：
一、PDH的提取
准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4 ℃11000 g离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长605nm，蒸馏水调零。
每个样本需要180μL工作液，按样本数取出一定量的工作液置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min。
空白管：在微量比色皿或96孔板中加入180μL工作液和10μL水，混匀，立即记录605nm处初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，计算ΔA空白=A1-A2。
测定管：在微量比色皿或96孔板中加入180μL工作液和10μL样本，混匀，立即记录605nm处初始吸光值A3和1min后的吸光值A4，计算ΔA测定=A3-A4。
三、PDH活性计算
a.用微量比色皿测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。
PDH活性（U/mg prot）＝[(ΔA测定-ΔA空白)÷（ε×d）×V反总×109]÷(Cpr×V样) ÷T
=904.762×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。
PDH活性（U/g 鲜重）＝[(ΔA测定-ΔA空白)÷（ε×d）×V反总×109]÷(V样÷V样总×W) ÷T=913.81×(ΔA测定-ΔA空白)÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。
PDH活性（U/104cell）＝[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样÷V样总×500)÷T=1.828×(ΔA测定-ΔA空白)
V反总：反应体系总体积，1.9×10-4L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入试剂一和试剂二体积，1.01 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。
PDH活性（U/mg prot）＝[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V样) ÷T
=1809.524×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。
PDH活性（U/g 鲜重）＝[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样÷V样总×W) ÷T=1827.62×(ΔA测定-ΔA空白)÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。
PDH活性（U/104cell）＝[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样÷V样总×500) ÷T=3.655×(ΔA测定-ΔA空白)
V反总：反应体系总体积，1.9×10-4L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，21×103mol/L/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入试剂一和试剂二体积，1.01 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
注意事项：
1、测定过程中所有样本在冰上放置，以免变性和失活。
2、测定管的ΔA值在0.01-0.25之间，若测定管的ΔA值大于0.25，需将样本进行稀释。
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