HR8659 细胞膜染色试剂盒(PKH67)

PKH67标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。PKH67毒性较小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。PKH67标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。PKH67

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试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

● 流式细胞仪或荧光显微镜或激光共聚焦 ● 离心机、移液器 ● PBS缓冲液 ● HBSS（不含酚红）

使用注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 染色浓度根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。

● 配制的PKH67母液极易水解，建议分装保存，分装后用封口膜密封管口，再用锡箔纸包裹，最好和干燥剂一起用塑料袋密封，≦-20℃冷冻保存。

● PKH67工作液现配现用，不能提前配制，PKH67吸水会分解，影响染色效果。

● PKH67易被水解，在水溶液中会很快变质。母液请在使用过程中避免接触水。工作液在标记细胞的过程中和水接触是在许可的时间范围内的。

● PKH67溶解液在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以37℃水浴片刻至全部融解后使用。

● 不同的细胞种类标记后可以示踪的代次或时间差异较大，请根据实际情况或参考文献进行检测。

使用方法：

1、试剂配制：

从冰箱中取出PKH67试剂，静置几分钟至室温，或者37℃水浴片刻后，离心盛放PKH67的管子，开盖前请务必离心几分钟让试剂充分落入管底后才能开盖。

2、根据需要检测的细胞样品数，用稀释液将探针10倍稀释，再用合适的溶液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）将PKH67母液25倍稀释，配制成染色工作液。

【注】：

● 也可以不用试剂盒中的稀释液，直接用HBSS 稀释即可。

● 最佳的工作液浓度请根据不同细胞和自身的实验体系来调整。

● 一般细胞使用按试剂盒中的母液的终浓度250倍稀释即可，有些细胞可能需要适当增加浓度。

3、将制备好的待测细胞用100μL染色工作液重悬，至细胞浓度大约10⁷/ml。

【注】：

● 也可以进行原位染色，染色液足够覆盖细胞即可。

4、在2-8℃培养箱中孵育15-30分钟。

【注】：

● 建议待标记细胞在染色工作液中于37℃孵育5min，再于4℃孵育15min。

● 低温孵育可降低细胞对染料的内吞作用，有助于染料对质膜的标记，并且降低染料定位细胞质囊泡的可能性。

5、离心后去上清，收集细胞，用PBS或无血清培养基洗涤细胞1-2次，最后加入PBS或无血清培养基重悬细胞。

6、取500μL细胞悬液，用流式细胞仪检测。Ex/Em=490/502nm。

7、随后还可按照细胞的正常培养方法进行培养。

可以在荧光显微镜下直接观察标记效果，也可以在培养适当时间后再用流式细胞仪检测细胞增殖，或用于其他特定实验目的的细胞荧光示踪。

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