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所在地：北京
型号：HR0079
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更新时间：2023-06-02
浏览次数：1080
公司地址：北京市海淀区紫雀路33号院3号楼
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王欣(女士) （来电时请说是从给览网看到我的)
产品特点：
● 使用方便，提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
● 提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30 分钟-1 小时。
● 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
● 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
● 蛋白提取液含多种有效成分，可充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
● 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6 种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 离心机 ● 振荡器 ● 涡旋混匀器 ● 移液器 ● PBS ● 蛋白定量试剂盒
使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
● 新鲜全血样品按下列步骤操作，已提取的单核细胞样品从步骤10开始操作。
使用方法：
1. 提取液制备：
按需要提取的样品数量，每400μL冷的蛋白提取液C 中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
2. 取1.5mL 新鲜抗凝血，静置吸去上层血浆。
3. 加入1mL 细胞提取液A，轻轻吹打混匀，冰上静置5分钟。过程中适当偶尔轻微摇动混合均匀。
4. 在4℃，400-500×g离心5 分钟，弃上清，收集底部细胞沉淀。
5. 在细胞沉淀中加入1mL细胞提取液A，轻轻吹打混匀。
6. 冰上静置5 分钟，过程中适当偶尔轻微摇动混合均匀。
7. 在4℃，400-500×g 离心5分钟，弃上清，收集底部细胞沉淀。
8. 在细胞沉淀中加入400μL 细胞提取液B，轻轻吹打混匀。
9. 在4℃，1000×g 离心5 分钟，弃上清，收集底部细胞沉淀。
10. 在细胞沉淀中加入100-200μL冷的蛋白提取液C，充分混匀。
11. 在4℃条件下振荡20-30分钟。
【注】：
● 用振荡器/摇床的较低转速，保持提取液轻微晃动即可。
● 没有振荡条件的话可以不振荡，置2-8℃静置，稍微延长蛋白提取液处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
12. 在4℃，12000g 条件下离心15 分钟。
13. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到单核细胞总蛋白。
14. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
● 蛋白浓度低？
处理样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂B 的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。直至沉淀数量明显减少。
● 细胞裂解速度慢？
为了充分保证提取得到的蛋白的活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。
● 用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford 法，因为试剂A 中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
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