HR0163 植物胞质蛋白提取试剂盒

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、酶活性测定等蛋白研究。本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯合层析等下游应用兼容。

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产品特点：

1、使用方便。

2、将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。

3、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 离心机 ● 涡旋混匀器 ● 振荡器 ● 匀浆机/匀浆器 ● PBS ● 蛋白定量试剂盒 ● 100μm细胞筛

使用注意事项：

● 旋帽离心管装试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

● 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

● 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

使用方法：

1、提取液制备：

每1mL预冷的蛋白提取液A中加入4μL蛋白酶抑制剂，充分混匀后置冰上备用。

【注】：

● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需再次加入蛋白酶抑制剂。

● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配好的含蛋白酶抑制剂的提取液。

2、取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg植物组织样本，用手术剪刀尽可能剪碎，然后加入500μL提取液A后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。

【注】：

● 尽可能充分匀浆，至无明显可见固体。

● 培养细胞直接收集细胞后用Dounce匀浆器匀浆即可，匀浆后加提取液A混匀后直接进行以下步骤离心。

3、将匀浆液用100μm细胞筛过滤。

【注】：

● 液体量少时可以加入少量PBS混匀后再用细胞筛过滤。

● 没有细胞筛时可以不过滤，将匀浆液静置1分钟，待大的没有破碎的组织块自然沉降，吸取上清。

● 部分黏液较多的植物样本可能难以吸取，可以将1mL吸头的口剪掉一点再吸。

4、将滤液在200×g条件下离心3分钟，弃沉淀，收集上清。

5、将上清在4℃，800×g力条件下离心5分钟。

6、弃沉淀，将上清（I）移入另一干净的离心管。

7、在上清（I）中加入50μL胞质提取液B，高速涡旋振荡15秒，充分混匀。

8、在4℃条件下振荡15-20分钟。

【注】：

● 震荡时用振荡器/摇床的较低转速，保持液体轻微晃动即可。

● 没有振荡条件也可不振荡，稍微延长试剂B处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

9、在4℃，12000×g条件下离心10分钟。

10、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到细胞质蛋白。

11、将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA法进行蛋白定量。

● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

常见问题分析：

● 蛋白浓度低？

处理部分样本是可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

● 用什么方法定量蛋白？

建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性吗？

本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

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