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所在地：北京
型号：HR0113
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更新时间：2023-06-02
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公司地址：北京市海淀区紫雀路33号院3号楼
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王欣(女士) （来电时请说是从给览网看到我的)
产品特点：
● 使用方便。
● 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
● 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
● 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 离心机 ● 振荡器 ● 匀浆机/匀浆器 ● 涡旋混匀器 ● 移液器 ● PBS ● 蛋白定量试剂盒
使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
● 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
● 下游实验如果是进行特定蛋白酶的活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
● 离心机转速有相对离心力(RCF,×g)和每分钟转速(RPM)两种表示方式,有些离心机设置有RPM和×g显示切换,但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
G=r×1.118×10-5×rpm2(r为有效离心半径,即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度,单位为厘米)例如：转速为3000rpm,有效离心半径为10cm,则相对离心力(RCF,×g)为=10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。
使用方法：
1、提取液准备：
每200μL提取液B中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
【注】：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需再次加入蛋白酶抑制剂。
● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
2、取100-200mg真菌组织样本用手术剪刀尽可能剪碎。
3、加入500μL-1mL提取液A，用组织匀浆器/匀浆器充分匀浆。
4、匀浆液在2-8℃振荡30分钟。
【注】：
● 使用振荡器/摇床的较低转速,提取液能轻微晃动即可。
● 没有振荡条件也可不振荡,稍微延长提取液的的处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
5、将提取液在4℃下1000×g离心5分钟，弃上清，留沉淀。
6、在沉淀中加入200μL冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒。
7、在2-8℃振荡40分钟-1小时。
【注】：
● 使用振荡器/摇床的较低转速,提取液能轻微晃动即可。
● 没有振荡条件也可不振荡,稍微延长提取液的的处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
8、在4℃，12000-14000×g条件下离心10分钟。
9、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
10、将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA法进行蛋白定量。
● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
● 蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A和B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
● 用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford 法,因为试剂A 中含有干扰Bradford 法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford 法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
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